利用基因芯片检测性传播疾病

目的 探讨基因芯片在性传播疾病检测中的应用。方法 针对中国主要流行的7种性传播疾病病原体,选择高度保守的特异基因片段为芯片探针．将其PCR扩增产物用MicroGrid Ⅱ型全自动点样仪点样于包埋有醛基的载玻片上,制备成性病检测基因芯片。对7种临床病原DNA样本及阴性样本进行扩增、标记,与芯片杂交后,用激光共聚焦荧光扫描仪检测并分析结果。结果 该芯片可以从病原体感染样本DNA中检测到阳性参照序列以及与病原体相对应的特异基因片段。结论 性病检测基因芯片能对性传播疾病病原体做出快速、准确的检测。     

抗人白介素-17RA单克隆抗体的制备及活性检测

目的制备具有中和人白介素-17RA（h IL-17RA）免疫活性的单克隆抗体,并探讨其生物学活性。方法通过基因工程技术制备抗h IL-17RA的单克隆抗体。采用OctetRED系统检测其亲和力,ELISA、Western blot和流式细胞术分析抗体的结合作用和种属交叉反应,人包皮成纤维细胞-1上细胞因子分泌实验检测抗体的中和活性。结果抗h IL-17RA单克隆抗体亲和力常数KD<1.0×10^-12mol/L,并与其他物种有一定的交叉结合反应,它能结合白介素（IL）-17RA并有效阻断其与配体的结合,抑制下游相关细胞因子IL-6、IL-8和人CXC趋化因子配体1的分泌。结论成功制备1株抗h IL-17RA的中和抗体,为IL-17RA相关疾病通路的研究提供了工具,也为IL-17RA靶点药物的开发奠定了一定的基础。     

H10N8禽流感病毒血凝素中和抗体的结合位点鉴定

目的制备并筛选H10N8型禽流感病毒血凝素蛋白的中和抗体,并对其抗原结合位点进行鉴定。方法采用基因工程技术制备H10N8血凝素蛋白单克隆抗体,通过假病毒微量中和实验筛选中和抗体,ELISA和Western blot实验确定抗体结合血凝素蛋白的区域,Discovery Studio 3.5模拟与对接分析软件预测抗原结合位点,进而研究其在H10亚型内的保守性。结果获得1株具有假病毒中和活性的H10N8单克隆抗体,该抗体的结合表位在HA1上,且具有H10亚型内的保守性。结论成功制备1株中和抗体,为H10N8禽流感疫苗和单克隆药物的研究提供了基础。     

重组人血小板CD36基因真核表达载体的构建及蛋白表达

目的制备具有功能活性的重组人血小板表面CD36抗原的纯化表达蛋白胞外区30～439氨基酸残基段。方法提取人肝细胞组织总RNA,经RT-PCR扩增编码人血小板CD36抗原胞外区(Gly30～Asn439)氨基酸残基cDNA,构建于原核表达载体pMD18并转化大肠杆菌DH5α,筛选获得阳性重组子pMD18-CD36,提取质粒。经序列测定后,将该基因插入到真核细胞瞬时表达载体pTE2上,构建成为pTE2-s-CD36-10 his真核瞬时表达载体。采用lipofectamine 2000(invitrogen)转染法,将重组质粒转染HEK-293细胞,表达产物经Ni2+2NTA柱层析纯化。结果 RT-PCR扩增获得了1.4 kb的片段。invitrogen测序,该序列分析结果与Genebank中的NM_001001547.2完全一致。SDS-PAGE证实转染的HEK-293细胞表达了人CD36抗原胞外区蛋白片段。结论利用构建的真核载体pTE2-s-CD36转染人胚肾细胞(HEK293)可高效表达CD36 Gly30～Asn439,得到纯化蛋白,为人血小板CD36表面抗原对血小板输注无效影响的深入研究奠定基础。