酶标记抗体法鉴定抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体特异性的观察

单克隆抗体是近年发展起来的一种新技术。本实验应用酶标记抗体法,鉴定抗hCG单克隆抗体的特异性,并与抗hCG多克隆抗体比较,以积累使用单克隆抗体的经验。 取人早期妊娠(40～60天)胎盘绒毛、大鼠和小鼠垂体各4例,固定于4％多聚甲醛,4℃下孵育24小时。经磷酸缓冲液浸洗3天后,脱水、透明、石蜡包埋。另人垂体4例是我校病理教研室提供的、经10％福尔马林固定后石蜡包埋的组织块。全部标本均作厚5μ的连续切片,同时进行免疫组织化学染色。用作第一抗体的抗hCG多克隆抗体是我校第一医院制备     

顺序应用PAP-PAP法PAP-ABC法和ABC-ABC法双染大鼠垂体激素

双染法,即在同一张组织切片上显示二种抗原,以研究二种抗原产生于同一种细胞还是不同种细胞以及这些细胞的位置关系。此法在国外已被广泛应用,但国内尚未普遍开展。本实验顺序应用PAP法(Perox idase Antiperoxidase method酶抗酶法)和ABC法(Avidin Biotin Complex method抗生物素生物素法)两种免疫组织化学方法即PAP-PAP法、PAP-ABC和ABC-ABC法,双染大鼠垂体的两对激素,以取得双染法的经验。     

大鼠心脏心钠素免疫组织化学的观察

本文用特异的抗心钠素血清,藉免疫组织化学方法,研究大鼠心脏心钠素免疫反应物质的定位,观察到在大鼠心房各部位的心肌细胞中均有特异的心钠素免疫反应颗粒。这些颗粒主要定位在核周胞质中,特别在核的两端。心室内未见免疫反应染色。     

大鼠肺心钠素样免疫活性物质的免疫组织化学观察

本文应用高特异性的抗人心房利钠多肽血清和PAP免疫组织化学方法,观察到心钠素样物质分布在肺静脉壁的部分肌细胞和肺泡隔的一些细胞内。这种物质在肌细胞内定位于核周的胞质中。含有这些物质的肺泡隔细胞多成群存在,胞体大,呈圆形或不规则形,胞质内含有许多心钠素样物质的颗粒。此种细胞的性质尚待进一步研究。     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备与鉴定

利用杂交瘤技术制备了11株抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)的单克隆抗体。根据这些抗体和~(125)I 标记的hCG,hCGα,hCGβ和hLH 结合的情况,可将抗体分为三类。抗体BAH_2作用于hCG_α和β亚单位结合后所暴露出的抗原决定簇,抗体10E_5和8D_5特异地和hCGβ亚单位结合但不和hLH 结合。大多数抗体是作用于hCG 和hLHβ亚单位上共有的决定簇。实验显示这些单克隆抗体特异性优于多克隆抗体,它们亲合常数在5.3×10_7～7.2×10~(10)M~(-1)之间。     

注射大剂量促黄体素释放激素类似物后受孕大鼠黄体细胞的超微结构变化

受孕大鼠共20只,于受孕第9天随机取10只,注射大剂量促黄体素释放激素9肽类似物(LRH—A)后1和2天取材,作为给药组;其余10只为对照组。用透射电镜观察,比较两组大鼠黄体细胞的超微结构。给药组黄体细胞胞质内脂滴增多,出现许多大脂滴;滑面内质网排列紊乱、减少和溶解;线粒体有退化;自噬泡、溶酶体、髓样小体、多泡体以及残余体等结构增多;高尔基复合体在给药后1天肥大,以后转入萎缩。细胞表面微绒毛减少。以上结果提示,受孕9天大鼠注射大剂量 LRH-A后,黄体细胞在形态上趋向退化,在功能上分泌降低。     

注射大剂量促黄体激素释放激素类似物后受孕大鼠垂体促性腺激素细胞的免疫组织化学变化

本文用特异的抗鼠促黄体激素(抗LH)、抗鼠卵泡刺激素(抗FSH)和抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)血清,以PAP免疫组织化学方法,观察注射大剂量促黄体激素释放激素类似物(LHRH-A)后受孕大鼠垂体促性腺激素细胞的变化。注射后24 h,促性腺激素细胞的免疫组织化学反应明显减弱;注射后48 h,促性腺激素细胞的免疫组织化学反应开始恢复;注射后168 h,其恢复过程仍在进行。计数对照组和实验组不同免疫反应强度的LH细胞数和它们占LH细胞总数的百分数,并用统计学方法检验,发现其结果与上述一致。大剂量LHRH-A能刺激受孕大鼠垂体促性腺激素细胞释放大量LH,从而抑制卵巢合成孕酮的功能,并导致终止妊娠。本文支持这种看法,而且认为,这种对促性腺激素细胞分泌活动的影响是可以恢复的。     

注射大剂量促黄体激素释放激素类似物后受孕大鼠垂体促性腺激素细胞的形态计量学分析

本文用特异的抗鼠促黄体激素(抗LH)血清,以PAP免疫组织化学法显示促性腺激素细胞(LH细胞),并用形态计量学方法研究注射大剂量促黄体激素释放激素类似物(LHRH-A)后,受孕大鼠促性腺激素细胞的数量、体积和核质比参数的变化。察表明注射大剂量LHRH-A后24小时,促性腺激素细胞的数目减少,细胞变小,核质比增大。每mm~3垂体组织中的细胞数由(4.254±0.21)×10~4个减少到(2.49±0.14)×10~3个;细胞体积由1295±35μm~3减到895±31μm~3;核质比由0.144±0.005加大到0.229±0.010。注射后48小时,这些变化已经开始恢复。注射后168小时各参数均恢复。我们认为,注射大剂量LHRH-A后,受孕大鼠促性腺激素细胞的变化是由于外源性大剂量LHRH-A刺激促性腺激素细胞,使其释放大量LH,大剂量LHRH-A对促性腺激素细胞的影响是可恢复的。     

免疫过氧化物酶技术

免疫过氧化物酶技术是近十多年来发展起来的一种新的免疫组织化学技术,由于它比免疫荧光和免疫铁蛋白技术有较多的优点,近几年来发展很快,已广泛应用于细胞生物学、病理学和医学理论方面的研究。一、几种免疫过氧化物酶的方法目前免疫过氧化物酶的技术已有多种(图1)。每一种都是利用特异的抗原抗体反应和辣根过氧化物酶(HRP)的活牲。HRP在H_2O_2存在的条件下,分解H_2O_2而使某些化合物(底物)氧化成有色的不溶性产物,沉着在抗原的部位。因此应用这种技术能在显微镜下观察组织和细胞内抗原的分布和定位。     

PAP法显示人早期胎盘绒毛促性腺激素(hCG)的定位

收集了8例正常人早期胎盘组织,采用PAP法显示人胎盘绒毛hCG的定位。观察结果表明仅合体滋养层细胞质内有免疫组织化学阳性反应,而合体滋养层细胞核、细胞滋养层细胞和绒毛轴心都是阴性反应。这结果证实了大多数学者的看法,即hCG定位在合体滋养层细胞质内。比较了三种免疫过氧化物酶方法的敏感性,肯定了PAP法优于酶标记抗体法,双PAP法又优于PAP法。由于PAP法不仅敏感性高而且特异性染色与非特异性染色之间的对比清楚,因此认为此法最可采用。 本工作还对不同固定液和孵育的不同温度和时间对PAP法染色的影响作了比较和讨论。