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目的构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP,并探讨Daxx对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导VSMCs增殖的影响。方
法基于PAS（PCR-based Accurate Synthesis）的方法构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP。经测序和酶切验证后,用重
组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP与包装辅助载体共转染293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒液纯化后感染VSMCs,
Western blot法鉴定过表达Daxx的VSMCs株。然后将pCDH-EGFP病毒液感染的空载体细胞和pCDH-Daxx-EGFP病毒液的
感染的过表达Daxx细胞都分成无血清培养基孵育组和AngⅡ孵育组。用MTT法检测细胞活性、流式细胞术观察细胞周期、划
痕法检测细胞迁移、Western blot法检测细胞中p-Akt蛋白表达。结果基因测序与双酶切鉴定表明Daxx基因慢病毒表达载体
构建成功;与Vector组比,转染Daxx组、蛋白表达水平明显增加（P<0.05）;经AngII处理后,转染Daxx组细胞活性、S期细胞比率
和与细胞迁移率与Vector 组比较显著降低（P<0.05）;转染Daxx组细胞中p-Akt 蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论成功构建
了重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP和过表达Daxx 的VSMCs株;Daxx能显著抑制AngII诱导的VSMCs增殖和迁移,
其机制可能与p-Akt蛋白有关。 相似文献
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动脉粥样硬化(As)作为泛血管疾病的慢性动脉壁炎症反应,是导致心脑血管疾病的主要原因之一。目前,越来越多研究表明环状RNA(circRNA)可介导微小RNA(microRNA,miRNA)调控靶基因信使RNA(mRNA)的表达,通过复杂信号传导通路调控内皮细胞(EC)、血管平滑肌细胞(VSMC)和巨噬细胞的增殖、迁移、分化、凋亡及炎症等过程,参与As形成与发展的病理生理过程。文章就circRNA/miRNA/mRNA的生物学功能及其对As的影响进行综合分析,以期为动脉粥样硬化性疾病的诊治提供新思路。 相似文献
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目的 探讨乙酰水杨酸姜黄素酯(curcumin acetylsalicylate,CA)对血管紧张素II(Angiotensin II,AngII)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖的抑制作用及其相关机制.方法 建立AngII诱导的VSMC增殖模型.采用MTT法、流式细胞术观察CA干预对细胞活力和周期的影响.Western blot检测其对第10号染色体同源缺失性磷酸酶张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化AKT(p-AKT)、AKT蛋白表达的影响.结果 1、3、10μmol/L CA可以显著抑制AngII诱导的细胞活力,其中3μmol/L为最佳浓度(P<0.05).在CA的干预下,与AngII组比较,流式细胞术显示VSMC G0/G1期细胞数量明显增加,S期明显减少;Western blot显示其可以促进PTEN蛋白表达,从而抑制AKT激活(P<0.05).结论 CA可以抑制AngII诱导的VSMC增殖,其机制与阻滞VSMC G0/G1期向S期转化,以及调节PTEN/AKT信号通路有关. 相似文献
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