肠上皮细胞HIF-1α对结肠炎的缓解作用及机制研究

目的研究肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在炎症性肠病中的作用以及对调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的影响。方法采用肠上皮特异性HIF-1α敲除(HIF-1α~(△IEC))小鼠,建立葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的溃疡性结肠炎动物模型(给予3%DSS处理7 d)。结果 DSS条件下,HIF-1α~(△IEC)小鼠遭受更严重的体质量减轻,结肠长度缩短和更高的疾病活动指数。同时,HE染色显示HIF-1α~(△IEC)小鼠结肠破坏更严重。mRNA分析显示促炎因子水平更高。此外,肠炎条件下,敲除鼠体内Tregs上调受到抑制。结论 HIF-1α在诱导产生Tregs和调节肠道炎症中具有重要作用。     

丁酸盐在小鼠结肠炎损伤中的缓解作用及机制研究

目的研究丁酸盐在葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导小鼠结肠炎损伤模型中的缓解作用及机制。方法建立DSS诱导的溃疡性结肠炎动物模型,每天称量小鼠体质量、观察大便性状、进行组织学损伤评分;qPCR和ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量变化,q PCR和免疫组化分别检测抗菌肽的mRNA和蛋白水平变化。结果在DSS诱导结肠炎后,小鼠体质量明显减轻,结肠长度显著缩短,疾病活动指数及组织学评分明显增高。同时抗菌肽表达有所上调,促炎因子表达增高;对结肠炎小鼠给予丁酸盐处理,小鼠疾病活动指数及组织组织学评分降低,抗菌肽表达明显上调,促炎因子表达降低。结论丁酸盐对DSS诱导的小鼠结肠炎具有缓解作用。其机制可能是通过上调抗菌肽,抵御外来病原体入侵,降低炎症反应,从而缓解结肠炎。     

血管紧张素转换酶抑制剂促进短肠综合征大鼠肠黏膜的适应性代偿

目的 通过SD大鼠短肠综合征(SBS)模型,研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对肠黏膜的保护作用及其机制.方法 成年雄性SD大鼠18只,采用随机数字表法分为3组: Sham组(空回肠单纯离断吻合)(n=6);SBS组(切除大约75%中段小肠,n=6);ACEI组[(SBS+ACEI)2 mg·kg-1·d-1](n=6).术后10 d取材,测量大鼠小肠绒毛高度和黏膜层厚度,TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况,RT-PCR技术检测肠黏膜ACE mRNA表达.结果 术后ACEI组体质量恢复速度快于SBS组,但二者都明显慢于对照组(P<0.05).SBS组黏膜绒毛较对照组明显增生肥大,绒毛高度和隐窝深度(总高度)增加约50%[(778±30)μm vs (502±40)μm,P<0.01],给予ACEI后,肠黏膜厚度较SBS组增高更明显[(870±29)μm vs (778±30)μm,P<0.01],75%小肠切除引起了残留肠段肠上皮细胞凋亡的显著增加[(5.46±0.95)% vs (1.01±0.49)%,P<0.05],给予ACEI显著抑制了肠切除所引起的残留肠段肠上皮细胞凋亡的增加[(2.39±0.70)%,P<0.05].SBS组ACEmRNA水平较对照组明显增高,给予ACE抑制剂后ACE水平进一步增高 (P<0.05).结论 肠切除后ACE的升高与上皮重塑密切相关,ACEI的应用可以抑制肠上皮细胞凋亡,促进肠黏膜适应性代偿.     

S-亚硝基谷胱甘肽对小鼠肠急性缺血再灌注损伤后肠屏障功能的影响

目的：探讨 S-亚硝基谷胱甘肽（GSNO）预处理对小鼠肠急性缺血再灌注（I／R）所致的肠黏膜屏障损伤的影响。方法6～8周龄雄性 C57BL／6小鼠24只,分为 Sham 组、I／R 组、I／R＋GSNO 组,每组8只。采用夹闭肠系膜上动脉30 min,再灌注6 h作为小鼠肠 I／R 模型。苏木素-伊红（HE）染色观察小肠组织形态学的变化;免疫组织化学观察肠上皮细胞间紧密连接蛋白 clau-din-1的表达情况;Western blot 检测 claudin-1蛋白水平变化。结果 HE 染色显示,与 Sham 组比较,I／R 组肠黏膜明显肿胀,绒毛部分脱落、变粗,绒毛倒伏、断裂,而 I／R＋GSNO 组肠黏膜无明显肿胀,绒毛完整,形态接近正常;免疫组织化学观察显示 I／R刺激可造成肠上皮表面 claudin-1连续性明显破坏,阳性表达率明显降低,I／R＋GSNO 组肠上皮 claudin-1连续性明显恢复,阳性染色显著增加;肠上皮 claudin-1蛋白定量分析显示：与 Sham 组比较,I／R 组及 I／R＋GSNO 小肠上皮紧密连接蛋白 claudin-1表达分别下降32．5％,13．8％（P ＜0．05）;与 I／R 组比较,I／R＋GSNO 组小鼠肠上皮紧密连接蛋白 claudin-1表达上调27．8％（P ＜0．05）。结论小肠急性 I／R 刺激可造成明显的肠黏膜损伤及肠上皮间紧密连接的显著破坏;GSNO 预处理可通过上调 claudin-1表达,有效缓解 I／R 对肠黏膜结构与肠上皮屏障功能的损伤。     

甘露糖结合凝集素对肠上皮细胞屏障功能的影响

目的 观察甘露糖结合凝集素(mannose binding lectin,MBL)对人结肠癌细胞株Caco-2屏障功能的影响并探讨其分子机制.方法 体内实验:取14只C57小鼠,按随机数字表法分为假手术组和LPS组(经腹腔注射LPS,构建肠炎症损伤模型),通过免疫组化和Real-time PCR观察MBL的变化情况,HE染色观察肠黏膜的损伤情况.体外实验:Caco-2细胞分为对照组、空转染组和MBL shRNA组(应用MBL干扰质粒转染Caco-2细胞),采用Real-time PCR、Western blot检测紧密连接蛋白的表达情况,并检测其跨上皮电阻(TER).结果 体内实验TER显示LPS组肠黏膜通透性(80.32 ±5.43)比假手术组(140.45 ±4.78)明显增加(P＜0.01),HE染色显示LPS处理后肠黏膜完整性比假手术组降低,免疫组化和Real-time PCR检测结果显示LPS处理组MBL表达升高(P＜0.05).在体外实验中,我们成功构建MBL shRNA质粒模型,MBL shRNA组细胞中MBL的蛋白和mRNA表达[(0.34±0.09),(0.42±0.12)]较对照组及空转染组明显降低(P＜0.05).MBL shRNA组的紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1的蛋白[(0.43±0.10)、(0.53±0.11)]和mRNA水平[(0.43±0.08)、(0.45±0.10)]明显低于其余组(P＜ 0.05);MBL shRNA组TER值(80.33 ±7.64)降低较其余组明显(P＜0.05).结论 下调MBL基因可减少肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1 mRNA及蛋白水平的表达,减弱肠上皮细胞的屏障保护功能.     

缺氧条件下环磷酸腺苷对肠黏膜屏障功能的调控研究

目的探讨缺氧条件下环磷酸腺苷（cAMP）水平的变化对肠黏膜屏障功能的影响。方法采用人结肠癌Caco．2细胞建立肠上皮细胞缺氧模型,分为常氧组、常氧加Forskolin组、缺氧8h组和缺氧8h加SQ22536（腺苷酸环化酶抑制剂）组。采用cAMP检测试剂盒,检测实验各组cAMP水平的变化;RT-PCR及Westernblot方法分别检测各组肠上皮紧密连接蛋白claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达水平的变化：Millipore电阻抗系统法检测各组肠上皮细胞跨上皮电阻（TER）的变化情况。结果缺氧8h组肠上皮cAMP含量较常氧组明显升高[（6．30±0．50）pmol／L比（2．38±0．18）pmol／L,P〈0．01],而claudin．1和occludin的mRNA及蛋白表达水平均明显降低（均P〈0．05）,TER值下降了6．30±0．64（P〈0．01）。与缺氧8h组相比,缺氧8h加SQ22536组肠上皮cAMP含量明显降低[（2．12±0．23）pmol／L比（6．30±0．50）pmol／L,P〈0．01],claudin-1和occludinmRNA及蛋白表达水平明显升高（P〈0．01）,TER值升高了32．96±2．16（均P〈0．05）。结论缺氧条件下cAMP水平升高,而下调cAMP水平可增加肠道紧密连接蛋白claudin-1及occludinmRNA及蛋白水平的表达,从而减轻缺氧对肠上皮屏障的损伤。     

γ干扰素对缺氧肠上皮屏障功能影响及其机制

目的 观察γ干扰素(IFN-γ)对缺氧肠上皮细胞屏障功能的影响,探讨其分子机制.方法 对HT-29细胞进行缺氧及IFN-γ处理,检测跨上皮电阻(TER)、缺氧诱导因子-1α( HIF-1α)蛋白及肠三叶因子(ITF)、黏蛋白3(mucin-3)、CD73、CD55、血小板活化因子受体(PAFR) mRNA表达的变化.结果 缺氧+ IFN-γ使TER明显下降(较常氧和缺氧下降33.8％、28.3％),使HIF-1α蛋白较缺氧降低72.1％,使ITF、mucin-3、CD73、CD55、PAFR mRNA分别较缺氧降低53.3％、31.1％、74.6％、62.4％,但PAFR mRNA水平两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IFN-γ能使缺氧肠屏障功能降低,与IFN-γ使HIF-1α蛋白降低,并抑制HIF-1α下游的肠屏障调节因子密切相关.     

防风通圣散治疗急性湿疹扁桃体炎的临床应用

防风通圣故是金元四大医家寒凉派刘河间著《宣明论》中一方。本方属强攻之剂。方中防风、麻黄、荆齐德、薄荷流风解表，使风邪从汗而解；大黄、芒硝泻热通便，使里热积滞随便而解；滑石、枝子清湿热利尿，引热邪从小便排出；黄羊、石膏、桔梗、连翘清肺胃积热；川穹、白芍、当归养血和血；白术健脾燥湿；甘草和中缓急调和诸药，共起解毒通里，清热化毒之功效。采用此方治疗两种病证，收效甚佳，介绍如下：－，急性湿疹性皮炎典型病例：女，39岁。1994年7月就诊。此患者在几年前曾使用化壮品后引起面部红肿、病痒。经治疗红肿、瘙痒消退，但…