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目的用聚合酶链式反应(PCR)扩增人巨细胞病毒UL32、UL44截短基因,构建pET-32a-UL32-UL44表达载体,转化宿菌大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,对目的蛋白进行纯化、标记HRP,用于检测IgM抗体。方法根据Gene-bank中HCMV的pp150、pp52蛋白序列,利用Protean计算机软件分析其亲疏水性和抗原性,选取适合的区段,根据其对应的UL32、UL44基因核苷酸序列设计合成引物,PCR扩增目的基因序列,经测序证明无误之后,克隆pET-32a-UL32-UL44重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行诱导表达,纯化目的蛋白,标记HRP,用ELISA捕获法对目的蛋白-HRP标记物的灵敏性和特异性等指标进行评价。结果成功构建pET-32a-UL32-UL44重组质粒,导入在BL21(DE3)菌株中,经诱导后目的蛋白表达于上清中,经纯化、标记HRP,标记物用于ELISA捕获法能够准确、特异地检测HCMV血清标本,80份血清检测结果显示其灵敏度可达92.5%,特异性达97.5%。结论 HCMV基因工程重组蛋白具有较好的免疫活性,为研制以基因工程重组抗原代替传统全病毒抗原的HCMV检测试剂盒打下了基础。 相似文献
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目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)免疫层析技术快速检测分型方法的临床应用价值。方法采用免疫层析技术快速检测法对人乳头瘤病毒进行检测分型,采用基因检测技术PCR检测法作对照。结果对386例标本进行HPV常见亚型6、11型和16、18型检测,快速检测法与对照PCR检测法均105例阳性,阳性率均为27.20%,两种方法的阳性率一致(P>0.05)。对HPV亚型总的分型检测,快速检测法检出阳性105例,阳性率为27.20%;对照PCR检测法检出HPV阳性142例,阳性率为36.78%,两种方法的阳性率差异有统计学意义(χ2=8.15,P<0.05)。结论免疫层析快速检测分型方法用于HPV常见亚型6、11型(低危型)和16、18型(高危型)检测,具有操作简便,检测速度快,准确率高,医疗成本较低等特点,值得基层医院推广应用。 相似文献
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