创伤弧菌溶血素基因的高效表达与鉴定

目的:构建创伤弧菌溶血素基因(vvs)的融合表达载体,并实现创伤弧菌溶血素在大肠杆菌中的高效表达.方法:用一对创伤弧菌溶血素基因特异性引物从创伤弧菌基因组DNA中钓取眦基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET-32a( )-vvc融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物行SDS-PAGE并进行West-ern Blot鉴定.结果:构建了pET-32a( )-vvc融合表达载体,DNA测序证明,获得的vvc基因长度为1311 bp,与Gen-Bank中报道的创伤弧菌溶血素基因序列完全一致.SDS-PAGE分析表明,vvc融合蛋白Mr为71×103,其表达量约占菌体总蛋白的32%.Western blot结果显示,目的蛋白可与创伤弧菌免疫后的小鼠血清特异性结合.结论:成功地实现了VVC基因在大肠杆菌中的高效表达,为进一步研究僦蛋白的生物学功能奠定基础.     

survivin蛋白的原核高效、可溶性表达及其抗体在恶性肿瘤早期诊断中的应用

目的 实现重组survivin在大肠杆菌中的高效、可溶性表达,检测健康人和肿瘤患者血清中anti-survivin并探讨其在肿瘤早期诊断中的应用价值.方法 重组PET32a-survivin质粒转化BL21感受态细胞,IPTG诱导表达8 h后对表达产物行溶菌酶处理、冻融及超声处理,SDS-PAGE及Western blot鉴定后用镍离子金属螯合层析柱纯化.建立基于重组融合蛋白的survivin特异性抗体的检测方法,对300份健康血清、144份肿瘤血清anti-survivin进行了检测,并将anti-sur-vivin与肝癌、肠癌、胰腺癌、卵巢癌患者中AFP、CEA、CA199、CA125等肿瘤标志物进行了联合分析.结果 重组survivin融合蛋白在BL21中获得了高效、可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的30%.建立了检测survivin抗体的间接ELISA方法,anti-survivin在不同的肿瘤血清中均有表达,阳性率各不相同.结论 成功的实现了survivin蛋白在大肠杆菌中的高效、可溶性表达;结果提示在肿瘤的辅助诊断中,anti-survivin与现有的肿瘤标志物CA199、CEA、CA-199和CA-125联合检测,可以互相补充其不足,提高肿瘤的诊断率.     

改良肌酐酶法试剂抗酚磺乙胺干扰能力的验证与评价

目的对改良肌酐酶法试剂的抗酚磺乙胺干扰能力进行性能验证与评价。方法严格按照中华人民共和国卫生行业标准WS/T416—2013《干扰实验指南》方案,采用贝克曼库尔特AU5821全自动生化分析仪分别使用贝克曼、利德曼、迈克生物3个厂家生产的肌酐酶法检测试剂测定含不同酚磺乙胺浓度的低中高浓度肌酐血清样本,分析3种肌酐酶法试剂对酚磺乙胺的抗干扰能力并对改良肌酐酶法试剂抗酚磺乙胺干扰能力进行验证和评价。结果未添加酚磺乙胺时,三种试剂测定的不同血清肌酐浓度的相对偏倚均符合要求(<5.5%)。当样本血清酚磺乙胺浓度在50~300 mg/L时,贝克曼肌酐试剂测定低中高浓度肌酐血清样本的结果有明显负偏倚(-38.8%^-88.2%),利德曼肌酐试剂测定低中高浓度肌酐血清样本的结果也有明显负偏倚(-57.3%^-89.6%),迈克生物改良肌酐试剂测定低中高浓度肌酐血清样本偏倚较小(-4.7%^-25.2%)。结论迈克生物改良肌酐试剂抗酚磺乙胺干扰能力较强,能减少因肌酐假性减低导致的疾病漏诊,对临床相关疾病的诊断和治疗监测具有重要意义。     

肺炎支原体检测方法的临床应用

肺炎支原体是引起人类非典型肺炎主要的病原体之一,临床表现常无特异性,快速、准确的实验室诊断可以及时有效地指导临床治疗。现对目前国内外采用的肺炎支原体诊断方法进行探讨比较,以期能为临床医师选用合适的检测方法、作出及时准确的诊断提供参考。