医学免疫学创新研究短课的探索

医学免疫学是基础医学中难度很大的一门课程。为解决教学中出现的一些问题,深圳大学探索开设了创新研究短课,试图更好地激发学生创新思维,促进学生学习的主动性和积极性。经过三年教学实践,问卷调查显示绝大部分同学认为免疫学创新性短课对提升自主学习和团队讨论的能力、免疫学原理的整体理解、免疫学最新研究进展的了解和免疫在日常生活中的运用等都有帮助。免疫学短课的开展使学生从被动接受知识变成主动探索,有效提高了教学质量。     

白纹伊蚊AL-100 30 ku蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建

目的克隆白纹伊蚊主要过敏原AL-100 30 ku蛋白基因,并构建其原核表达载体。方法RT-PCR克隆白纹伊蚊主要过敏原AL-100 30 ku的全长基因,设计简并引物,扩增白蚊伊蚊30ku的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接,构建原核表达载体。结果成功克隆白纹伊蚊主要过敏原30ku基因并构建其原核表达载体。该基因含有长度为816bp的开放阅读框,编码271个氨基酸。该蛋白质的分子质量单位为28.33ku,等电点为4.04,编码序列与数据库中已知的白纹伊蚊30ku基因的同源性为99％。结论成功克隆了白蚊伊蚊主要过敏原30ku基因并构建了原核表达载体,为白纹伊蚊主要过敏原30ku蛋白的重组表达和免疫活性鉴定等奠定了基础。     

鸡蛋主要过敏原Gal d1片段基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定

目的克隆、表达和纯化鸡蛋主要过敏原Gald1区基因,并对其免疫学活性进行鉴定。方法用生物信息学方法对鸡蛋主要过敏原Gald1基因进行抗原表位预测,设计特异性引物,用PCR的方法分别扩增Gald1N端和C端基因,将其分别连接到原核表达载体PET32a上。重组质粒转入大肠杆菌,用IPTG诱导表达,通过镍亲和柱层析法纯化重组蛋白,最后用Western-blotting检测重组蛋白的免疫原性。结果表达的蛋白均以可溶性为主,N端融合蛋白相对分子质量为28600,C端融合蛋白相对分子质量为26800,纯化的N端和C端蛋白均有较好的免疫原性,C端的免疫原性强于N端。结论成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原基因Gald1的N端和C端,为鸡蛋过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础。     

鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因的克隆及原核载体构建与表达

目的:本研究利用PET表达载体克隆,表达鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因,为鸡蛋过敏疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了一定的基础.方法:提取鸡输卵管组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增卵类粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),并与已知序列进行同源性比较,将该片段连接入原核表达载体pET-28a,IPTG诱导表达目的蛋白.结果:成功克隆鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白(ovomucoid,OVM)的全长基因,该基因的开放阅读框长度为633 bp(包括终止密码子),编码210个氨基酸,与GenBank提供的OVM基因序列同源性达99%.该序列编码的蛋白为小分子量蛋白,相对分子质量约为21 kD,与理论值均相符.IPTG诱导表达后,SDS-PAGE 分析表明目的蛋白在宿主大肠杆菌BL21 (DE3) 中高效表达.结论:本研究采用体外重组的方法克隆出卵类粘蛋白基因,并实现在大肠杆菌中大量表达,这为后续鸡蛋食品基础性研究奠定基础.     

核酸条码标识法PSA检测试剂盒的研制及验证

目的：建立核酸条码标识法检测前列腺特异性抗原（PSA）的方法,临床血清标本验证灵敏度、特异性等指标,并与试剂盒ELISA及RIA检测结果比较。方法：采用自制免疫磁球和双标记纳米金探针,利用双抗体夹心法原理,将PSA的检测转化为对核酸条码片段的检测,制备核酸条码法PSA检测试剂盒,对45例前列腺癌患者,45例前列腺良性增生患者,15例其它肿瘤患者,30例正常人群血清标本进行验证。结果：临床血清标本灵敏度约92,特异性约为68,假阳性率32,检测平均回收率大于95,批内变异系数（CV）为6.24,重复性平行性良好。与ELISA及RIA进口试剂盒检测结果比较,三法的差异无显著性（P〉0.05）,相关性良好,吻合度强。结论：建立的核酸条码标识PSA检测方法,为超微量蛋白质检测提供一种新的方法。     

非特殊型浸润性乳腺癌超声检查与Ki-67表达的关系

目的 探讨非特殊型浸润性乳腺癌（IBC-NST）超声检查与Ki-67表达的关系。方法 选取经病理证实的IBC-NST患者70例,整理其术前乳腺超声检查及术后病灶组织免疫组化检测显示Ki-67表达情况。依据病理学检查结果中Ki-67免疫组织化学染色情况,将患者分为Ki-67高表达组（45例）与Ki-67低表达组（25例）,比较Ki-67高表达组、低表达组乳腺超声特征差异,总结超声检查特征与Ki-67表达的关联性。结果 70例患者中Ki-67高表达组45例,占比为64.29%。两组患者超声检查显示病灶直径、纵横比、边缘、血流分布特征比较,差异有统计学意义（P<0.05）;Ki-67高表达组病灶直径≥2 cm、纵横比≥1、边缘毛刺、富血供占比更高。Logistic多因素回归分析显示,病灶直径≥2 cm、富血供与Ki-67高表达组呈正相关（P<0.05）。结论 IBC-NST患者病灶Ki-67表达较高,且病灶直径的增大、血供的增加与Ki-67高表达直接相关。     

重阳木花粉过敏原的分离、纯化和鉴定

目的对重阳木花粉变应原蛋白进行分离、纯化和鉴定。方法采用Coca s液提取重阳木花粉的粗提液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离粗提液蛋白质组分,并测定其分子质量;收集过敏患者血清,用Western blot法鉴定其变应原成分;通过离子交换层析对重阳木花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果分离得到重阳木花粉18条蛋白带,其中分子质量为12和14 ku的是重阳木花粉的特异性变应原,通过离子交换柱层析方法纯化得到其相应的纯化蛋白。结论对重阳木花粉变应原进行了初步的分离、纯化和鉴定,为临床重阳木花粉过敏疾病的诊断和治疗奠定了基础。     

高校医学临床技能培训中心建设和管理的探讨

临床实践教学是医学教学过程中的重要组成部分。随着现代高等医学教育技术的发展,临床技能培训中心的建设和管理在本科医学教育中起着越来越重要的作用。为了顺应高等医学教育发展的趋势,培养具有竞争力的高级医学人才,我校巨资引进先进技术,建设临床技能培训中心,本文现对医学院临床技能培训中心的建设和运营管理模式进行探讨。     

BSA-ELISA初步检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE

目的对短穗鱼尾葵花粉粗浸液的主要变应原进行分析、鉴定。方法通过SDS-PAGE分析短穗鱼尾葵花粉蛋白质组份,采用Western blotting鉴定主要变应原,以短穗鱼尾葵花粉粗浸液包板,摸索出其包被浓度、血清稀释度和酶结合物浓度,采用BSA-ELISA法对短穗鱼尾葵花粉过敏患者血清进行初步检测,并与皮肤挑刺试验比较。结果短穗鱼尾葵花粉粗浸液SDS-PAGE显示有30余条蛋白条带,其中主要蛋白条带有10条,Western blotting显示5例短穗鱼尾葵花粉过敏患者的混合血清能与其中3条蛋白条带起反应,分子量分别是26000、14000和12000Mr。BSA-ELISA检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE,最适粗浸液稀释度为1：100,血清稀释倍数为1：5,生物素化抗体为1：1000,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（strepavidin-HRP）为1：1000。在此条件下BSA-ELISA与浸液皮试比较,检出结果与皮试阳性患者血清符合率为90%,与皮试阴性患者符合率为80%,与健康人对照检测符合率为100%。结论本实验对短穗鱼尾葵花粉主要变应原进行了分离和鉴定,BSA-ELISA法测定结果与皮肤挑刺试验初步比较符合率较好。     

芝麻主要过敏原清蛋白基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

了芝麻是亚洲地区重要的油料作物,主要含有两种储存蛋白,为11S的球蛋白和2s的清蛋白,这两种蛋白占芝麻中总蛋白的80%～90%,清蛋白是其中主要的致敏蛋白之一.