可溶性血管内皮生长因子受体1真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

本研究旨在构建可溶性血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体1(soluble fmslike tyosine kinase-1,sFlt-1)的真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,并观察sFlt-1对血管内皮细胞增殖的影响。提取人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)总RNA,扩增Flt-1基因胞外1-3结构域,构建真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,测序鉴定基因序列。将重组质粒转染Lewis肺癌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE检测sFlt-1在基因及蛋白水平的表达情况。MTT法检测sFlt-1对VEGF诱导的HUVECs生长的影响。结果显示:①插入片段序列正确;②sFlt-1在基因水平成功表达且转染后的Lewis肺癌细胞能分泌表达sFlt-1;③含sFlt-1的细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖。本研究成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,sFlt-1,在基因和蛋白水平均获得有效表达,且表达的蛋白可明显抑制由VEGF诱导...     

sKDR真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

研究获取可溶性血管内皮生长因子受体2(sKDR)基因构建sKDR的真核表达载体,观察sKDR对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响.方法提取HUVECs总RNA,利用RT - PCR方法扩增KDR胞外免疫球蛋白1-3区基因片段,将其插入真核表达质粒pcDNA3.1中,测序鉴定基因序列正确后,用脂质体法将重组质粒p...     

5-Fu与TRAIL联用抗结肠癌细胞株HT-29效应的实验研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联用对结肠癌细胞株HT-29体外生长增殖、凋亡的影响,评价其联用效果.方法 体外培养HT-29细胞,采用磺基罗丹明B(SRB)法测定细胞的存活率,Webb系数法判断联用是否具协同作用,流式细胞FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡.结果 结肠癌细胞株HT-29对TRAIL不敏感(IC50＞10 μg·mL-1),对5-Fu敏感(IC50＜10 μg·mL-1);0.1、1、10 μg·mL-1 TRAIL分别与0.05、0.1、0.5 μg·mL-1 5-Fu联用48 h,除0.1 μg·mL-1 TRAIL与0.5 μg·mL-1 5-Fu联用组外,其余联用组细胞存活率均明显低于TRAIL单用组或5-Fu单用组水平;0.1 μ·mL-1 TRAIL及0.5 μg·mL-1 5-Fu单用或联用时,HT-29细胞凋亡率分别为8.6%、18.1%和30.8%.结论 5-Fu 与TRAIL联用具有协同的细胞毒和细胞凋亡作用.     

生长激素对急性胰腺炎大鼠胰腺微循环改变的影响

目的 观察急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺微循环功能的变化及重组人生长激素(rhGH)对其影响.方法 采用ip E. coli复制大鼠AP模型,SD大鼠随机分为对照组(C组)、AP组及rhGH治疗组(T组).C组仅ip生理盐水(15 ml·kg<'-1>);AP组ipE.coli(1×10<'10> CFU·L<'-1>,15 ml·kg<'-1>);T 组于ip E. coli后,im rhGH 2.25 U·kg<'-1>·d<'-1>.AP、T组又依观察时点再分为1、3 d两个亚组.采用异硫氰酸荧光素标记红细胞(FITC-RBC)技术及微循环观测系统观察胰腺微循环的变化.结果 AP组大鼠胰腺微循环红细胞流量、血液流速、血管数及功能血管数均明显低于C组的水平,尤以1 d时最为明显;T组大鼠的均明显高于AP组的水平,尤以3 d时最为明显.结论 rhGH可明显改善AP大鼠胰腺微循环功能的障碍.     

重组人生长激素对大鼠急性胰腺炎的治疗作用

目的观察重组人生长激素(rhGH)对大鼠急性胰腺炎(AP)的治疗并探讨其机制。方法ipE.coli复制大鼠AP模型。42只健康♀SD大鼠随机分为对照组(C组)、急性胰腺炎组(AP组)及rhGH治疗组(T组)。AP、T组再按观察时点分为1、3 d两个亚组。C组ip 15 m.lkg-1生理盐水;AP组ip 15 m.lkg-1E.coli(1×1010CFU.L-1)后立即im生理盐水;T组于ipE.coli后立即im 2.25 U.kg-.1d-1rhGH。观察胰腺的病变程度并进行评分,测定血清淀粉酶的活性,免疫组化检测胰腺组织中ICAM-1蛋白的表达及NF-κB核的阳性率。结果AP两亚组胰腺组织病理评分、血清淀粉酶活性、ICAM-1蛋白表达及NF-κB核阳性率均明显高于C组水平(P<0.05);rhGH治疗能明显降低上述指标水平,尤以T3d组降低最为显著。结论rh-GH治疗能明显减轻大鼠急性胰腺炎的损伤程度,其机制可能与降低NF-κB活化程度及ICAM-1蛋白的表达水平等有关。     

婴儿双歧杆菌介导的sKDR原核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的 构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响.方法 PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒.EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4 DNA连接酶将目的 基因片段和载体连接.电穿孔法将连接反应物转染婴儿双歧杆菌.厌氧培养重组质粒转化菌,并将其处理液加入由VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养基中培养24 h,MTT比色法测定细胞存活率.结果 PCR、酶切鉴定及核酸测序结果表明,获得了含pET32a-sKDR重组质粒的婴儿双歧杆菌;RT-PCR及SDS-PAGE电泳结果证实sKDR在基因及蛋白水平成功表达.与空质粒对照组相比,重组质粒转化菌处理液可明显抑制HUVECs增殖(P<0.01).结论 成功构建了婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因转运系统,体外实验证实其可明显抑制血管内皮细胞的增殖.