异羟基洋地黄甙（Digoxigenin）标记的DNA探针用于鉴定特异…

本文采用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（简称ＤＩＧ）标记的ＤＮＡ探针用于鉴定特异的ＥＢ病毒ＰＣＲ反应产物，根据ＥＢ病毒ＢａｍＨ１酶后产生的Ｗ片段的基因顺序合成一对外引物和一个内引物，由此外引物扩增的ＰＣＲ产物长度为１５４个碱基，用该引物对１００例石蜡包埋的劓咽癌组织，１３例劓咽癌活检组织及１１例畸胎 １００列人不良生育史的妇女血、羊水、绒毛标本中的ＥＢ病毒ＤＮＡ进行了检测，检测结果经电泳分析可见１５４碱基     

低密度脂蛋白受体基因突变及其RFLP连锁分析研究进展

家族性高胆固醇血症是由于低密度脂蛋白受体基因突变引起的常染色体显性遗传性疾病。用重组 DNA 技术是早期诊断该病最有效的方法。目前已报道至少22种基因部分缺失型、1种外来 DNA 片段插入突变型、5种点突变型和1种移码突变型。随着 DNA 技术的深入运用,将有更多的突变型被检测出来。本文综述了近年来低密度脂蛋白受体基因突变的筛选及其 RFLP 连锁分析的研究进展。     

腺病毒载体介导的血友病A基因治疗的实验研究

目的构建含人凝血因子Ⅷ基因（hFⅧ）的高效表达重组腺病毒载体。方法将含hFⅧ-cDNA（B肽缺失型）插入质粒pAdCMV－Linkerl多克隆位点,形成含SV40内含子结构的重组质粒pA－dl－hFⅧ。证实目的基因能在COS－7细胞中表达有凝血活性的FⅧ因子后,分别与pBHG10共转染至293包装细胞,经同源重组,形成E1／E3缺失型重组腺病毒AdI－hFⅧ。经鉴定和纯化,用于体内外基因转移和表达的研究。结果该病毒载体能在COS－7、A549等各种离体细胞高效转移,并表达hFⅧ蛋白。经家兔耳缘静脉注射后,hFⅧ因子表达量在l～2周内升至最高,并维持低水平至少4周。结论腺病毒介导的人B肽缺失型凝血因子Ⅷ基因能在体内外有效地转移和表达,该研究也为血友病A基因治疗提供了一条新途径。     

一种颈总动脉部分结扎-内膜新生模型的制备

目的 探讨一种左颈总动脉部分结扎后诱导血管重构（内膜新生）的方法。方法 8周龄雄性C57BL/6 J小鼠40只,随机分为6组：正常组（WT）、假手术组（sham）、术后4周、8周、10周和12周组。手术结扎左颈总动脉（LCA）远心端4个分支中的颈内、颈外和枕动脉,保留甲状腺上动脉,造成左颈总动脉血管内膜新生和血管重构。术后观察小鼠体重和饲料的消耗情况;HE染色观察血管形态学变化;天狼猩红染色观察血管胶原纤维聚集情况。结果 除正常组小鼠外,其他组小鼠术后1～2 d体重和饮食量均降低,第3天开始上升,假手术组小鼠第2天开始上升;HE染色表明,假手术组和正常组小鼠LCA均未形成新生内膜,部分结扎手术后4、 8、10和12周组小鼠LCA均出现内膜和中膜层的增厚、管腔狭窄等。右侧未结扎的颈总动脉无内膜增厚,但出现了管腔增大;天狼猩红染色显示,内膜和中膜增生部分有胶原积聚。结论 左颈总动脉部分结扎可以建立小鼠动脉内皮损伤模型并伴有明显的内膜新生。     

组蛋白脱乙酰酶2-核转录因子-κB/激活蛋白-1介导的重度哮喘对糖皮质激素不敏感的分子机制

 目的 探讨重度哮喘患者对糖皮质激素不敏感的分子机制,尤其从糖皮质激素/糖皮质激素受体（glucocorticoid/glucocorticoid receptor,GC/GR）及组蛋白脱乙酰酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）及其下游的炎性转录因子途径进行研究。方法 临床招募健康对照者12例,轻中度哮喘患者12例,重度哮喘患者10例,收集其外周血,进行地塞米松（dexamethasone,Dex）抑制IL-8释放试验,检测重度哮喘患者外周血单个核细胞（peripheral blood molecule cells,PBMCs）是否存在激素敏感性下降。通过Western blot和细胞免疫荧光染色法检测PBMCs的GRα蛋白质水平及跨膜转运情况。HDAC2活性试剂盒检测PBMCs核蛋白的HDAC2活性,Western blot检测磷酸化NF-κB、激活蛋白1（activating protein-1,AP-1）的亚基磷酸化c-Jun及磷酸化c-Fos的水平。结果 重度哮喘患者PBMCs在TNFα诱导IL-8释放实验中表现出对Dex敏感性下降;GR总蛋白质水平虽然代偿性升高,但GRα水平下降且向核内转移减弱;HDAC2活性降低,炎性转录因子NF-κB、AP-1亚基被激活。结论 重度哮喘患者的PBMCs中存在激素不敏感,可能是通过HDAC2-NF-κB/Ap-1介导的炎症通路引起了GRα表达量下降和转运能力降低。     

人FⅧ基因高效表达质粒的构建及其在Cos-7细胞中的表达

目的：构建人ＦⅧ真核表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋＦⅧＤＢ并观察其在Ｃｏｓ－７细胞中的表达活性。方法：采用缺失大部分Ｂ结构域的人凝血因子ⅧｃＤＮＡ（ＦⅧＤＢ），长度为４．６ｋｂ，将其插入含腺病毒序列表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋ１，构建了ＦⅧ真核表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋＦⅧＤＢ，用脂质体介导法将其转染Ｃｏｓ－７细胞，转染后２４，４８，７２小时分别用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、ＥＬＩＳＡ法及一期法测定培养细胞中ＦⅧＤＢｍＲＮＡ及ＦⅧ的含量与活性。结果：ＲＴ－ＰＣＲ法可检测到ＦⅧＤＢｃＤＮＡ转录的ｍＲＮＡ，ＥＬＩＳＡ法测得７２小时后ＦⅧ的含量为每２４小时１８ｎｇ／１０６细胞，一期法测得活性为每２４小时０．６Ｕ／１０６细胞，相当于正常人血浆中１００μｇ／ＬＦⅧ所产生的凝血活性的６０％。结论：所构建的ＦⅧ真核表达质粒在Ｃｏｓ－７细胞中具有一定的表达活性。     

脂蛋白脂肪酶的分子生物学

脂蛋白脂肪酶(LPL)是一种催化乳糜微粒和极低密度脂蛋白中甘油三酯分解的糖蛋白,表达基因定位于8P~(22),由10个外显子和9个内含子组成,非编码区域存在多种遗传多态位点。其表达受到多种位点的调控。错义和无义突变是LPL缺乏症的常见突变类型。     

二甲双胍对高脂小鼠颈动脉及肝脏内脂肪沉积的影响

目的 二甲双胍对高脂小鼠(ApoE基因敲除小鼠,自发动脉粥样硬化模型)颈动脉及肝脏内脂肪沉积的研究.方法 将20只雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为4组:高脂对照组、二甲双胍组、PCL手术组和PCL+二甲双胍组,其中二甲双胍给药剂量均为300mg/(kg·d),给药途径为灌胃;实验小鼠每天称重,记录体重和饲料的变化情况;...