(-)表没食子儿茶素没食子酸酯在D-半乳糖所致痴呆小鼠体内的抗氧化作用

目的研究(-)表没食子儿茶素没食子酸酯在D-半乳糖所致痴呆小鼠体内的抗氧化作用。方法通过给小鼠皮下注射D-半乳糖(150mg·kg-1)的方法,每天一次,连续注射六周,以制备痴呆小鼠模型。两周后,用(-)表没食子儿茶素没食子酸酯(2mg·kg-1或6mg·kg-1)对模型小鼠灌胃四周治疗。通过进行水迷宫与避暗实验观察(-)表没食子儿茶素没食子酸酯对D-半乳糖所致痴呆小鼠的学习与记忆力的影响。通过对生化指标检测观察(-)表没食子儿茶素没食子酸酯对D-半乳糖所致痴呆小鼠海马的超氧化物歧化酶与谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛的含量的影响。结果皮下注射D-半乳糖削弱了小鼠的记忆及学习能力,使D-半乳糖所致痴呆小鼠海马中超氧化物歧化酶与谷胱甘肽过氧化物酶活性下降和丙二醛含量增加。灌胃给予(-)表没食子儿茶素没食子酸酯(2mg·kg-1或6mg·kg-1)明显的改善了小鼠的认知能力,提高了D-半乳糖所致痴呆小鼠海马中超氧化物歧化酶与谷胱甘肽过氧化物酶活性,减少了丙二醛的含量。结论(-)表没食子儿茶素没食子酸酯对D-半乳糖所致痴呆小鼠发挥了一定的抗氧化作用。     

不同散发性乳腺癌群体的BRCA1和CEP17基因拷贝数

目的检测BRCA1和CEP17在BRCA1启动子甲基化和非甲基化的散发性乳腺癌中的基因拷贝数。方法按照BRCA1启动子甲基化状态将46例散发性乳腺癌分成甲基化组和非甲基化组。在由冰冻病理组织制作的组织印片上,应用双色荧光原位杂交(FISH)技术检测BRCA1和CEP17的基因拷贝数。本实验室自行PCR扩增BRCA1探针并标记生物素(Biotin ULS Labeling Kit,Fermentas Company);PCR扩增CEP17探针并标记CyTM3(Label IT Cy3TMLabelingKit,Mirus Bio Corporation)。探针的杂交效率通过对正常白细胞进行BRCA1/CEP17FISH来检测。结果在BRCA1启动子甲基化的乳腺癌组织中BRCA1和CEP17的平均基因拷贝数分别为1.70和1.77,而在非甲基化的组织中分别为2.25和2.33。两组间的BRCA1(P<0.001)和CEP17(P<0.005)基因平均拷贝数存在明显差异。但总体的BRCA1/CEP17比率没有显著不同(甲基化组平均为0.96,非甲基化组为0.97,P=0.32)。结论我们在中国乳腺癌群体中建立了FISH检测方法,并发现BRCA1基因拷贝数与启动子甲基化相关。     

自发性癫痫大鼠海马区谷氨酸转运体GLAST表达下调

[目的]通过对照实验探讨自发性癫痫大鼠（spontaneously epilepsy rats,SER）与正常Wistar大鼠海马区胶质细胞型谷氨酸转运体GLAST蛋白的表达情况,以期发现其与遗传性癫痫发病的关系。[方法]利用聚合酶链反应（PCR）扩增SER的特异性基因片段,筛选出SER;利用免疫荧光定位GLAST蛋白的表达,并应用免疫组织化学技术,检测GLAST蛋白在SER及正常Wistar大鼠海马内的表达情况。[结果]GLAST蛋白在SER海马的齿状回（DG）表达与正常Wistar大鼠相比明显减少（GLAST的表达为Wistar：52.67±11.5,SER：39.39±9.48,P〈0.05）,在海马CA1和CA3区表达差异无显著性意义（CA1区为Wistar：48.56±10.6,SER：45.84±7.20;CA3区为Wistar：43.29±10.6,SER：36.73±6.50,P〉0.05）。[结论]SER自发性癫痫可能与海马DG区GLAST蛋白表达下降有关;GLAST表达下降可能是由SER基因位点的突变引起的。     

维生素E对阿尔茨海默病模型学习记忆能力损伤的改善作用

目的：观察维生素E对阿尔茨海默病（AD）模型小鼠学习记忆能力的改善作用及其机制。方法：采用D-gal与NaNO2联合腹腔注射方法建立AD模型小鼠,在造模同时及模型建立后两个时间点灌胃给予维生素E（28,280IU／kg）观察疗效,实验结束后水迷宫检测各组小鼠的逃避潜伏期的变化,化学比色法检测脑组织AChE、SOD活性、MDA含量;免疫组织化学方法检测大脑皮层Aβ、NF-B表达的变化。结果：造模同时给予维生素E可使D-gal与NaNO2联合诱导的AD模型鼠的逃避潜伏期缩短[第1天F（3,56）=6．959;第2天F（3,56）=6．689;第3天F（3,56）=17．379;第4天F（3,56）：13．391;P〈0．05],AChE活性降低[F（3,28）=29．431,P〈0．05],SOD活性提高[F（3,28）=7．372,P〈0．05],MDA含量降低[F（3,28）=11．235,P〈0．05];同时可明显降低AD模型鼠脑组织中Aβ、NF-κB的表达（P〈0．05）。模型建立后给予维生素E未发现上述变化。结论：维生素E可预防化学诱导的AD模型小鼠学习记忆能力损伤,可能机制与提高SOD活性、降低MDA含量、降低AChE活性、降低脑组织中Aβ、NF-κB的表达等相关。     

自发性癫癎大鼠脑内电压门控钠通道亚型Mrna的研究

目的对照研究自发性癫癎大鼠(SER)和正常Wistar大鼠(WTC)脑内Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型钠通道α亚基mRNA表达情况。方法提取枕叶皮质、齿状回及海马CA1和CA3区组织总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及建立限制性内切酶图谱检测Ⅰ、ⅡA、ⅡN、ⅢA和ⅢN型钠通道的表达。结果SER枕叶皮质、齿状回及海马CA1和CA3区总钠通道(3.179±1.967、3.009±2.364、3.071±2.036、1.440±0.761)的表达略高于WTC(2.112±1.454、1.474±1.257、2.198±0.978、1.399±0.853),但差异均无统计学意义(P>0.05),SERⅢ型钠通道在海马的表达(1.066±0.276)高于WTC(0.419±0.098),且P<0.01,酶切图谱显示ⅢN型钠通道表达水平有明显上调。结论SER脑内海马Ⅲ型电压门控钠通道N亚型表达上调。     

EGCG对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠的抗凋亡作用

目的研究(-)表没食子儿茶素没食子酸酯对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠的抗凋亡作用。方法给小鼠每日按150mg·kg-1皮下注射D-半乳糖一次,连续注射6周,以制备阿尔茨海默病小鼠模型,造模2周后,给EGCG低剂量和高剂量治疗组小鼠每日分别按2mg·kg-1和6mg·kg-1灌胃给予EGCG一次,连续给药4周。通过HE染色、TUNEL染色、免疫组化和Western blot印迹分析等方法观察EGCG对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠脑内神经元凋亡情况及海马区促凋亡蛋白caspase-3的活性及表达。结果给小鼠连续皮下注射D-半乳糖明显的增加了神经元细胞凋亡指数(P<0.01),并提高了小鼠海马区caspase-3的活性及表达(P<0.05);EGCG(2mg·kg-1和6mg·kg-1)明显的降低了D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠神经元细胞的凋亡指数(P<0.01),并降低了小鼠海马区caspase-3的活性及表达(P<0.05)。结论EGCG通过抑制D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病小鼠海马区caspase-3的活性及表达,发挥有效的抗凋亡作用。     

不同糖浓度中大鼠DRG神经元相关蛋白表达及Ca2+浓度的测定

目的观察高糖对背根神经节(DRG)中瞬时感受器电位香草酸受体4(TRPV4)和蛋白激酶Cε(PKCε)的表达以及细胞内Ca2+浓度的影响,探讨其在糖尿病大鼠神经病理性疼痛形成中的作用机制。方法培养的新生大鼠DRG神经元分成正常对照组(C组)、中糖组(M组)和高糖组(H组)。48 h后通过蛋白质免疫印迹法测定DRG神经元TRPV4和PKCε的表达水平,并通过共聚焦显微镜测定DRG神经元[Ca2+]i的水平。结果 TRPV4、PKCε蛋白的表达上调且呈浓度依赖性。C组、M组、H组TRPV4蛋白分别为0.33±0.05、3.20±0.40和7.69±0.60;PKCε蛋白分别为0.88±0.04、1.08±0.08和1.97±0.35。在TRPV4激动剂4α-PDD的作用下,与C组比较,H组[Ca2+]i显著升高(P<0.05),且呈浓度依赖。结论高糖可以上调DRG神经元中TRPV4、PKCε蛋白的表达,增加神经元内Ca2+浓度。TRPV4、PKCε对DRG神经元内Ca2+起到了协同调控的作用。     

卡介菌多糖-核酸对二硝基氟苯诱导的接触性皮炎的治疗作用及机制

目的探讨卡介菌多糖-核酸对二硝基氟苯诱导的接触性皮炎的治疗作用,并探讨其可能的作用机制。方法利用二硝基氟苯诱导建立小鼠接触性皮炎动物模型。激发后48小时,肌肉注射卡介菌多糖-核酸。给药期间,隔日1次对激发部位进行评分,末次给药后24小时,取激发部位皮肤进行病理学观察,取外周血ELISA法检测血浆中IL-2,IL-4andIFN-γ水平,流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群的百分比。结果治疗作用研究结果表明:卡介菌多糖-核酸可剂量依赖性缓解二硝基氟苯诱导的小鼠接触性皮炎的症状,减少激发部位皮肤中炎症细胞的数目。作用机制研究结果表明:卡介菌多糖-核酸可剂量依赖性减少外周血中IL-4水平,增加IL-2和IFN-γ水平,增加外周血中CD4+T细胞百分比及CD4+T细胞与CD8+T细胞百分比的比值。结论卡介菌多糖-核酸有望成为一种有效的治疗接触性皮炎的药物,其作用机制可能与它调节T淋巴细胞亚群和细胞因子失调有关。     

EGCG通过NGF/TrkA通路影响APP/PS1小鼠脑内Aβ沉积的研究

目的探讨绿茶的有效多酚成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对淀粉样前体蛋白/早老素基因(APP/PS1)转基因小鼠脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积及其对海马内神经生长因子(NGF)相关神经生长因子受体(TrkA)信号通路的影响。方法采用免疫组化及Western blot法分别检测小鼠海马Aβ1-40、淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白表达水平,Western blot检测小鼠海马NGF及神经生长因子前体(proNGF)的表达水平及其共同受体TrkA下游细胞外信号调节激酶(ERK)通路相关蛋白的表达水平。结果免疫组化结果显示,模型组小鼠海马内Aβ1-40和APP表达(42.35±8.25、143.63±24.30)较对照组(13.04±4.36、19.89±4.93)均显著增加(均P0.05),治疗组(19.72±6.55、38.07±18.19)较模型组明显降低(均P0.05)。Western blot结果显示,与对照组(均为100)比较,模型组小鼠海马内Aβ1-40、APP的相对表达量增加(分别为363.39±45.77、499.51±65.75,均P0.01),与模型组比较,治疗组Aβ1-40、APP相对表达量显著降低(分别为179.77±18.17、160.42±44.55,均P0.01)。与对照组(均为100)比较,模型组NGF(16.39±4.03)、pro-NGF(25.92±5.37)、NGF/pro-NGF(63.64±10.68)、p-TrkA(7.92±2.13)、p-c-raf(7.37±2.66)、p-ERK1/2(13.53±4.44)及pCREB(3.95±1.56)的相对表达量降低(均P0.05);与模型组比较,治疗组NGF(80.78±12.18)、pro-NGF(48.63±3.83)、NGF/pro-NGF(165.84±19.02)、p-TrkA(72.33±6.21)、p-c-raf(88.12±5.33)、p-ERK1/2(60.21±10.34)及p-CREB(25.31±8.48)的相对表达量明显增加(均P0.05)。治疗组与对照组上述指标比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论 EGCG主要通过上调NGF/proNGF比例,增加NGF的相对表达,继而激活其下游特异性TrkA通路,显著增加TrkA、c-raf、ERK1/2及其下游效应蛋白CREB的磷酸化水平,从而抑制Aβ1-40和APP的表达,改善学习记忆障碍,发挥神经保护作用。     

5’-氮杂-脱氧胞苷酸联合他莫昔芬对乳腺癌耐药相关蛋白介导雌激素受体α阴性乳腺癌细胞多柔比星耐药的影响

目的:观察5’-氮杂-脱氧胞苷酸(5’-Aza-2’-deoxycytidine,5’-Aza-dC)联合他莫昔芬(tamoxifen,TAM)对乳腺癌耐药相关蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)介导的雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)阴性乳腺癌细胞多柔比星(adriamycin,ADR)耐药的影响。方法:5’-Aza-dC联合不同浓度TAM处理乳腺癌MDA-MB-435s细胞后,应用甲基化特异性PCR法检测ERα基因启动子区甲基化状态,蛋白质印迹法检测ERα与BCRP蛋白的表达,MTT法检测ADR半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)。结果:5’-Aza-dC可浓度依赖性去除MDA-MB-435s细胞ERα基因启动子区甲基化并恢复ERα蛋白的表达,0.5μmol/L5’-Aza-dC可获得较高水平ERα蛋白的表达;0.5μmol/L5’-Aza-dC或100μmol/LTAM单独处理细胞,对BCRP蛋白的表达水平无明显影响;0.5μmol/L5’-Aza-dC联合1、10和100μmol/LTAM处理细胞后,BCRP蛋白的相对表达量分别降低了18.3%、41.1%和75.3%;0.5μmol/L5’-Aza-dC联合10和100μmol/LTAM处理后,细胞对ADR敏感度分别增强至阴性对照组的1.4和4.2倍。结论:在5’-Aza-dC恢复ERα表达的前提下,TAM可显著下调ERα阴性乳腺癌细胞BCRP蛋白的表达并增强细胞对ADR的敏感度,2者联合可能成为逆转ERα阴性乳腺癌细胞多药耐药的一种途径。