免疫相关GTP酶Irgm1对小鼠暂时性大脑中动脉缺血再灌注模型脑神经元自噬发生的影响

目的 探讨免疫相关GTP酶1(Irgm1)在小鼠暂时性大脑中动脉缺血再灌注模型(tMCAO)中的表达及其对tMCAO小鼠大脑神经元内自噬发生的影响.方法 采用western blotting和免疫荧光染色,检测Irgm1和自噬相关基因LC3I/Ⅱ及P62在Irgm1+/+小鼠tMCAO脑组织内的表达水平及细胞定位;进一步比较Irgm1+/+及Irgm1-/-小鼠tMCAO大脑神经元内自噬发生的差异.结果 相比于假手术(sham)组,Irgm1在Irgrm1+/+小鼠tMCAO脑组织中表达明显增高,且主要分布于损伤侧皮层神经元内;同时我们也证实在小鼠tMCAO脑组织中LC3-Ⅱ表达增加(t=-16.448,P＜0.01),面P62表达明显减低(t=3.975,P＜0.05).我们进一步实验发现Irgm1-/-小鼠tMCAO脑组织内LC3-Ⅱ表达量低于Irgm1+/+小鼠tMCAO(t=4.073,P＜0.05),而P62表达量高于Irgm1+/+小鼠tMCAO(t=-3.383,P＜0.05).结论 在小鼠tMCAO模型中,Irgm1参与调节大脑神经元的自噬活动.     

白细胞介素10 通过抑制自噬调节树突状细胞功能

目的:研究白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)对树突状细胞(Dendritic cells,DCs)自噬及功能的影响。方法:体外培养C57BL/6 小鼠骨髓来源的DCs 分为对照组、LPS 刺激组、IL-10 干预组、IL-10 与雷帕霉素干预组、雷帕霉素干预组,分别通过流式细胞术分析DCs 表面共刺激分子CD40、CD80 的表达、DCs 摄取OVA 抗原的比例以及诱导OT2 细胞增殖比例,ELISA 检测DCs 分泌IL-6,TNF-β的水平等DCs 相关功能;蛋白免疫印迹法检测DCs 自噬蛋白LC3 的表达,比较组间差异,以探讨IL-10 对DCs 功能及自噬的影响。结果:(1)与LPS 刺激组比较,IL-10 处理组DCs 的表面共刺激分子CD40、CD80的表达下降、分泌IL-6、TNF-β水平下降、刺激T 细胞增殖的比例明显减弱、摄取OVA 抗原的能力增加,IL-10+雷帕霉素干预组的DCs 与IL-10 单独处理组相比,表面CD80 的表达明显增加(P<0.05)、分泌IL-6、TNF-β能力及刺激T 细胞增殖的能力均明显增加(P<0.000 1)。(2)DCs 的自噬相关蛋白(LC3 / LC3 比例)明显下降。结论:IL-10 可能通过抑制DCs 自噬水平调节树突状细胞功能。     

自噬在免疫及免疫相关疾病中的研究进展

自噬是细胞内溶酶体/内体参与的,涉及细胞增殖,分化及稳态平衡调节的降解过程.遗传学研究发现其在物种进化过程中较保守,从酵母到哺乳动物细胞中均有自噬相关基因的存在,提示自噬广泛参与各类生物正常的生理过程.近年来,随着研究的不断深入,人们发现自噬在许多疾病尤其在免疫相关疾病中亦扮演着重要角色,在感染,自身免疫,肿瘤免疫中所起的作用可为今后研究提供依据.     

抑制树突状细胞的自噬改善小鼠哮喘病情

目的 研究抑制树突状细胞(DCs)自噬对DCs功能及小鼠哮喘的影响.方法 (1)将BALB/c小鼠按随机数字表法分为3组:急性哮喘对照组(哮喘组)、哮喘自噬抑制剂氯喹(CQ)治疗组(CQ组)和空白对照组(对照组).哮喘组和CQ组利用卵清蛋白(OVA)诱导建立小鼠过敏性哮喘模型,CQ组加用CQ.用H-E染色观察各组小鼠肺组织的病理改变,酶联免疫吸附实验、蛋白质印迹实验、流式细胞术分别检测各组小鼠血清OVA特异性IgE以及肺DCs自噬水平、表面共刺激分子和主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(MHCⅡ)的表达水平.(2)体外用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3MA)抑制C57/B6小鼠骨髓源DCs自噬,检测DCs表面共刺激分子、MHCⅡ的表达水平.(3)获取OT2小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞,与各组肺DCs以1∶10的比例混匀,流式细胞术检测T细胞的增殖情况与活化反应.结果 (1)CQ组IgE的表达水平(P＜0.05)、肺炎症细胞浸润程度以及肺DCs自噬水平(P＜0.05)和CD86、MHCⅡ表达水平(P＜0.05)均低于哮喘组.(2)3MA体外抑制骨髓源DCs自噬后,DCs表面的CD86及MHCⅡ表达均低于哮喘组(P＜0.05).(3)CQ组肺DCs体外诱导的T细胞增殖能力与活化反应均弱于哮喘组(P＜0.05).结论 自噬抑制剂可抑制过敏性哮喘肺DCs的自噬,下调DCs表面共刺激分子、MHCⅡ的表达以及DCs诱导的T细胞增殖能力,改善哮喘病情.