β淀粉样肽22-35单克隆抗体的制备和应用

目的制备稳定分泌Aβ22-35单克隆抗体的杂交瘤细胞,以Aβ22-35单克隆抗体建立Aβ检测方法。方法以人工合成的Aβ22-35连接匙孔槭血蓝蛋白,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,制得能稳定分泌Aβ22-35单克隆抗体的杂交瘤细胞,采用Western blotting增强化学发光技术观察大鼠脑内Aβ含量。结果得到2株能稳定分泌Aβ22-35单克隆抗体的杂交瘤细胞,Aβ22-35单克隆抗体的Ig亚类为IgG3,青年组和老年组大鼠脑Aβ含量分别为9.8±2.8和13.36±2.65pmol/12mg脑组织。结论制备得到的Aβ22-35单克隆抗体特异性强,效价高,测得的老年大鼠脑Aβ含量显著高于青年大鼠。     

ZDY102对拟痴呆大鼠脑M受体的影响

目的　观察知母活性成分ZMS的异构体ZDY10 2对拟痴呆大鼠脑M受体及学习记忆功能的影响。方法　大鼠单侧脑基底核部位定位注射 β 淀粉样肽 (2 5～ 35 )和鹅蕈膏酸造成拟痴呆模型 ,设立不同剂量ZDY10 2治疗组、模型组和对照组 (注射生理盐水 ) ,分别用Y 迷宫测定学习记忆能力及放射配基结合分析法测定注射同侧脑内M胆碱受体密度。结果　拟痴呆模型大鼠学习和记忆成绩和脑M受体密度明显低于对照组。连续两个月喂服ZDY10 2的模型大鼠学习和记忆能力显著好于对照组 ,脑M受体密度也显著提高 ,而且脑M受体密度与动物的学习记忆能力呈显著正相关。结论　ZDY10 2能明显改善拟痴呆大鼠的学习记忆能力 ,同时能显著提高脑内M受体密度 ,从两者的显著正相关来看 ,提高脑M受体密度可能是ZDY10 2改善拟痴呆模型学习记忆的重要机制。和以往对知母活性成分的研究结果相比较可以看出 ,2 5位甲基的立体异构对上述效果无明显影响     

放射性同位素在药物研究上的应用(二)

放射示踪酶测定法的应用酶有一定的特异性,在某条件下,底物加入酶制剂或组织,检定底物的消耗和产物生成的速率,可以测定酶的活力。放射示踪酶测定是用一定量放射性底物,在特异酶的作     

四种“虚证”模型的建立及其与环核苷酸系统的关系

用小鼠造成四种病理模型:甲状腺素型(体内甲状腺素过多):他巴唑型(甲状腺功能抑制):氢考Ⅰ型(肾上腺皮质激素过多);氢考Ⅱ型(肾上腺皮质机能抑制)。以β激动剂造成血浆 cAMP 升高,以 M 胆碱激动剂造成血浆 cGMP 升高,并以助阳药(附子、肉桂),滋阴药(生地、龟板)作实验性治疗。结果表明,甲状腺素型及氢考Ⅰ型 cAMP 系统反应性升高,滋阴药使之改善,他巴唑型及氢考Ⅱ型 cGMP 系统反应性升高或 cAMP 反应性降低,助阳药使之改善。故初步认为前两种属"阴虚"模型,后两种属"阳虚"模型。     

知母皂甙元对东莨菪碱所致学习记忆障碍和脑胆碱乙酰转移酶活力降低的影响

目的:观察知母活性成分知母皂甙元(ZMS)对学习记忆和脑中胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性的影响。方法:腹腔内一次注射东莨菪碱建立小鼠拟痴呆模型,用避暗法及跳台法测定学习记忆能力,用~3H-乙酰辅酶A掺入法测定脑组织ChAT活性。结果:ZMS可使东莨菪碱拟痴呆小鼠在学习记忆实验中的错误次数明显减少,潜伏期显著延长,并能显著增强脑内ChAT活性。结论:ZMS能够提高东莨菪碱拟痴呆小鼠的学习记忆能力,增强脑内ChAT的活性,但是,由于ZMS提高ChAT活性没有明显的量效关系,而且Tacrine也有类似作用,所以很可能不是直接提高ChAT活性,而是通过提高脑M受体密度实现的。     

知母皂苷元对HEK293sw细胞APP和BACE1的影响

目的 探讨知母活性成分知母皂苷元(ZMS)对HEK293sw细胞淀粉样前体蛋白(APP)和β-位点APP切割酶1(BACE1)的影响.方法 常规培养HEK293sw细胞,加入不同浓度ZMS预处理24 h后,换为无血清培养,继续处理48 h后观察ZMS的作用.Western blotting和RT-PCR技术测定APP和主要β-分泌酶BACE1的表达;荧光分析法测定BACE1活力.结果有效终浓度1 μmol/L和10 μmol/L的ZMS对BACE1的mRNA和蛋白表达均有显著降低作用,但对APP的mRNA和蛋白表达无明显影响.荧光分析结果显示,10 μmol/L ZMS能显著降低BACE1活力.结论 ZMS显著降低HEK293sw细胞主要β-分泌酶BACE1的表达及活力,而对APP的表达无明显影响.     

病毒性肝炎细胞免疫状态的探讨——应用氘化胸腺嘧啶核苷淋巴细胞转化试验的初步报告

本文报道应用植物血凝素(PHA)为刺激原的氚化胸腺嘧啶核苷掺入淋巴细胞转化试验(~3H-TdR·LCT)检测90例各型肝炎、13例无症状HBsAg携带者,以及41名正常人的细胞免疫状况,并与形态学淋巴细胞转化试验(LCT)、玫瑰花环形成试验(E·RFC)相比较.结果提示,细胞免疫状态与病情预后关系密切.机体受肝炎病毒感染后,细胞免疫受明显抑制,若能迅速恢复,则病程终止;若抑制非常严重,终将促使患者死亡;若受持续抑制或原来机体细胞免疫功能较差,长期未能恢复正常者,则导致慢性化.在各型肝炎及携带者中,LCT均值无明显差异;E·RFC的结果虽与~3H—TdR·LCT相近,但灵敏性不及后者.本文并讨论了细胞免疫增强剂的可能适应证。     

慢性帕金森病小鼠模型的建立及其行为学稳定性研究

目的 探讨慢性MPTP帕金森病小鼠模型的建立方法及其行为学稳定的评价. 方法 小鼠先腹腔注射辅佐剂二丙苯磺胺(250mg/kg),0.5h后皮下注射MPTP(15mg/kg),每周2次,5周内总共注射10次.第7周开始观察小鼠的行为学变化,每周1次,连续观察6周.然后用免组化方法观察黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞数的变化. 结果 模型组与对照组(腹腔及皮下注射生理盐水)相比,造型结束后连续6周表现出稳定而明显的行为困难,第6周对照组与模型组的行为得分分别为(1996.7±281.3)分和(1369.0±149.4)分,(P＜0.05),开始制模起12周后黑质部位酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞仍显著减少,对照组黑质部位TH阳性细胞数为(30.4±4.7)个,平均灰度为182.29±8.67,而模型组则分别为(20.5±3.9)个和(158.88±13.88)个,2组间差异显著(P＜0.01),显示出帕金森动物模型的典型特征. 结论 联合使用MPTP与Probenecid可以成功制作帕金森病慢性小鼠模型,且该模型在造型结束后至少可稳定6周以上.     

ZDY101和SZ201对α-分泌性淀粉样前体蛋白生成的影响

目的探讨ZDY10 1和SZ2 0 1及二者不同配比联合应用对HEK2 93sw细胞生成α -分泌性淀粉样前体蛋白的影响。　方法用Westernblot法检测HEK2 93sw细胞生成的α -sAPP含量 ,观察ZDY10 1、SZ2 0 1及二者不同配比联合应用在 2 4～ 48h、48～ 72h时段内α -sAPP生成量的变化。　结果 2 4～ 48h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1浓度分别为 1× 10 - 5mol L时 ,α -sAPP含量分别为 2 .0 6± 0 .73、2 .6 4± 1.2 1,明显高于DMSO对照组的 1.0 0(P <0 .0 1) ;48～ 72h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1单独应用且浓度分别为 1× 10 5mol L时 ,α -sAPP含量也明显高于DMSO对照组的 1.0 0 (P <0 .0 1)。二者相加的效果高于ZDY 10 1、SZ2 0 1单独应用 (P <0 .0 5 )。如果二者联合应用 ,降低各自的浓度 ,总浓度仍为 1× 10 - 5mol L时 ,提高α -sAPP含量的效果不明显。　结论ZDY10 1、SZ2 0 1在一定浓度时 ,能增加α -sAPP的生成 ,二者联合应用效果更强。     

β肾上腺素受体不可逆阻断剂BAlpM的合成

A highly potent beta-adrenergic irreversible antagonist——Bromoacetylalprenololmenthane (BAlpM)was synthesized by a Six step method with phenol and allychloride as the starting materials. Some improvement on purification of the product was described. The final product is identified by melting point, elemental analysis, UV and IR spectral analysis and mass spetrometry as well as β-adrenergic receptor bindingassays. [¹²⁵I]±IODOPINDOLOL binding assay of mouse lung cell membrane preparations treated with BAlpM in vitro or in vivo showed that there was a dosedependant decrease in the density of specific binding sites with no change in the Kd values. This result confirms that BAlpM is a β-adrenergic irreversible antagonist.