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目的克隆表达一个新的旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX,初步探讨其免疫学特性,为研究新的防治方法奠定科学基础。方法从GenBank旋毛虫核酸数据库中筛选出功能未知的CathepsinX基因部分EST序列,使用RACE-PCR方法得到其全长编码基因序列。半定量RT-PCR分析该基因的转录。构建该基因的原核表达载体pET30a-TsCPX,大肠杆菌中IPTG诱导表达,His-tag亲和层析纯化获重组蛋白TsCPX;将纯化的重组蛋白40μg/只免疫BALB/c小鼠,免疫前1周及每次免疫后2周收集免疫血清,间接ELISA检测血清总IgG、亚类IgG1、IgG2a抗体浓度。结果 RACE-PCR克隆出TsCPX全长基因序列,共1227bp;RT-PCR揭示TsCPX在旋毛虫三个发育时期均有380bp扩增条带,条带光密度分析显示最高转录水平出现在新生幼虫期。E.coli原核表达体系中成功克隆表达出重组蛋白TsCPX;重组蛋白免疫小鼠二次后,免疫血清总IgG迅速上升,三次免疫后达到峰值(P<0.001);IgG亚类IgG1抗体浓度随着免疫次数的增加迅速上升,亚类IgG2a无明显上升,两者间差异有统计学意义(P<0.001)。结论成功克隆的TsCPX基因在旋毛虫的三个生长发育时期均有转录表达,TsCPX重组蛋白具有较强免疫原性,能引起宿主(小鼠)Th2型为主的免疫应答,具有作为旋毛虫病免疫预防研究靶分子的潜在价值。 相似文献
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目的克隆表达一个新的旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX,初步探讨其免疫学特性,为研究新的防治方法奠定科学基础。方法从GenBank旋毛虫核酸数据库中筛选出功能未知的CathepsinX基因部分EST序列。使用RACE-PCR方法得到其全长编码基因序列。半定量RT—PCR分析该基因的转录。构建该基因的原核表达载体pET30a-TsCPX,大肠杆菌中IPTG诱导表达,His—tag亲和层析纯化获重组蛋白TsCPX;将纯化的重组蛋白40斗g／只免疫BALB／c小鼠,免疫前1周及每次免疫后2周收集免疫血清,间接ELISA检测血清总IgG、亚类IgG1、IgG2a抗体浓度。结果RACE—PCR克隆出TsCPX全长基因序列,共1227bp;RT．PCR揭示TsCPX在旋毛虫三个发育时期均有380bp扩增条带,条带光密度分析显示最高转录水平出现在新生幼虫期。E．coli原核表达体系中成功克隆表达出重组蛋白TsCPX;重组蛋白免疫小鼠二次后,免疫血清总IgG迅速上升,三次免疫后达到峰值（P〈0．001）;IgG亚类IgGl抗体浓度随着免疫次数的增加迅速上升,亚类IgG2a无明显上升,两者间差异有统计学意义（P〈0．001）。结论成功克隆的TsCPX基因在旋毛虫的三个生长发育时期均有转录表达,TsCPX重组蛋白具有较强免疫原性,能引起宿主（小鼠）Th2型为主的免疫应答．具有作为旋毛虫病免疫预防研究靶分子的潜在价值。 相似文献
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