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目的 构建肝素酶(heparanase,Hpa)反义RNA真核表达载体。方法 提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索出的Hpa基因cDNA序列,设计并合成反义Hpa基因片段的引物,进行RT-PCR,并将扩增产物克隆至DGEMT载体,PCR鉴定及测序证实后,双酶切pGEM-T-antiHpa重组体回收目的片段,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,并对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析。结果 PCR扩增出的反义片段与预期长度相符。构建的Hpa反义RNA表达质粒pcDNA3.1-antiHpa,分别作PCR及双酶切(BamHⅠ和HindⅢ)鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与反义Hpa序列设计完全一致。结论 成功构建了Hpa反义RNA真核表达载体pcDNA3.1-antiHpa,此结果为进一步研究Hpa蛋白分子的生物学功能和以Hpa为靶点的恶性肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。 相似文献
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以愈溃散为主,辅以中药辩证内服治疗慢性下肢溃疡28例,治愈26例,总治愈率大90%以上,随访5年无一例复发,取得了较好的临床效果。 相似文献
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