α-地中海贫血种植前基因诊断妊娠成功

【目的】探讨种植前基因诊断的临床应用。【方法】对 1例夫妇均为东南亚缺失型α 地中海贫血携带者 ,经超排取卵、卵母细胞单精子显微注射受精及胚胎细胞活检 ,吸取的单个卵裂球采用针对α SEA基因的 gap PCR引物和荧光探针用荧光定量PCR技术进行诊断 ,将诊断为不致病的 3个胚胎进行宫腔内移植。【结果】胚胎移植后 7周B超诊断单胎妊娠 ,18周羊膜腔穿刺产前诊断证实为不致病胎儿。【结论】应用成熟的显微操作技术进行胚胎细胞活检 ,活检的单个卵裂球用荧光定量PCR技术进行诊断 ,获得国内首例α 地中海贫血胚胎种植前基因诊断后妊娠成功。     

慢性前列腺炎症状评分与前列腺液白细胞数量相关性分析

慢性前列腺炎（chronic prostatitis，CP）是影响男性生活质量和生殖健康的一种常见疾病。据美国国家健康研究院（national institute of health，NIH）的资料，前列腺组织学检出率达44％-100％，临床发病率为5％-50％。慢性前列腺炎病因不明，前列腺局部炎症在慢性前列腺炎发病机理中的地位很难定论。本文综合分析了我院门诊就诊的260例CP患者的临床症状，并进行NIH慢性前列腺炎症状评分（chronic prostatitis symptom index，CPSI），探讨其与前列腺液（expressed prostatic secretion，EPS）中白细胞数量的关系，报告如下。     

人胚胎干细胞原代克隆生长及其传代的研究

目的 评价人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长的关系。方法 D3废弃胚胎成组共培养获得不同质量的囊胚，免疫刀去除囊胚滋养外胚层细胞后，将内细胞团(ICM)接种到饲养细胞层上生长、传代。结果 从质量好的囊胚得到的人胚胎干细胞传代的代数更多；原代克隆生长快的人胚胎干细胞传代效率更高。结论 人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长情况密切相关。     

应用两轮荧光原位杂交进行人类植入前胚胎染色体嵌合型的研究

目的应用2轮荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)对人类植入前胚胎染色体嵌合型的发生机制和影响因素进行初步研究。方法选择体外受精与胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transplantation,IVF-ET)治疗周期中不适于胚胎移植和冷冻的正常受精胚胎为研究对象,固定后进行2轮FISH,分析13、16、18、21、22、X、Y等7条染色体组成。结果51个胚胎中正常胚胎14个(27.5%),嵌合型16个(31.4%),无规律分裂12个(23.5%),异常非嵌合型9个(17.6%)。5～8细胞期胚胎中嵌合型胚胎的比例显著高于≤4细胞期胚胎(40.0%比12.5%)。非整倍体胚胎的比率在≥35岁组为57.1%,显著高于<35岁组(23.3%)。结论胚胎染色体嵌合型是植入前胚胎的常见现象,可能是影响IVF成功率的重要因素,而应用2轮FISH技术可有效地进行常见染色体异常的筛查。     

盆腔炎与生育

生育是复杂而有序的生物过程。正常的生育过程至少应具备下列三个条件：首先是两性配子的形成；其次是两性配子的相遇、受精；最后是胚胎在宫腔的植入和妊娠的维持。任何因素间接或直接地影响上述各环节，均可导致不育。女性的盆腔是女性内生殖器官的处所，盆腔及其器官的...     

人卵巢组织两种超低温冻存方法的研究

【目的】探索两种人卵巢组织冷冻方案用于生殖细胞保存的效果。【方法】活检卵巢组织来自15名经知情同意的手术患者。组织被随机分配到新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速冷冻组。观察和比较各组卵巢组织冻融后的原始卵泡形态完整率，并通过体外培养系统测定培养液中的雌二醇和孕酮水平，观察和比较冻融后卵巢组织内分泌功能。【结果】本研究中新鲜组、慢速冻融组和玻璃化冻融组的原始卵泡形态完整率分别是97．6％、72．6％和80.3％。两冻融组与新鲜组相比明显下降俨〈0．001），而在两冻融组间差异并无统计学意义（P=0．237）。在体外组织培养期间，两种冻融卵巢组织都能持续分泌雌二醇和孕酮，两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。【结论】本研究中两种人类卵巢组织超低温冷存的方法是可行的，可适应不同需要。     

用全染色体涂抹探针进行卵母细胞第一极体荧光原位杂交

 【目的】建立用全染色体涂抹探针（WCP）对卵子第一极体进行荧光原位杂交（FISH）检测染色体的方法。【方法】收集单精子卵胞浆内注射（ICSI）中不成熟卵母细胞经体外培养成熟和常规试管婴儿（IVF）中未能成功受精的成熟卵母细胞，活检第一极体，固定后行13、14号染色体的全染色体涂抹探针荧光原位杂交。活检后，一部分卵母细胞固定行FISH以分析卵子自身的13、14号染色体，其余行ICSI受精，观察受精和卵裂情况。【结果】共获得成熟母细胞93个，成功活检85个，成功固定78个，共29个第一极体处于分裂中期，均有FISH结果。卵母细胞体外培养成熟后立即取极体进行固定，90．5％（19／21）的极体处于分裂中期，而取卵后30-48h和72h后活检的第一极体处于分裂中期的比例分别为27．3％（6／22）和11．4％（4／35），3组相比有统计学差异（P〈0．01）。11个卵母细胞同时获得了极体和相对应卵细胞的FISH结果，其中10个极体和相对应的卵细胞分别有1条13，14号染色体，剩余1个卵母细胞的极体有2条14号染色体和1条13号染色体，相对应的卵细胞仅有1条13号染色体，二者互补。活检后行ICSI受精的卵母细胞受精率为78．6％（11／14），优质胚胎率45．5％（5／11）。【结论】全染色体涂抹探针对卵子第一极体进行遗传分析可以有效、准确地推测相对应卵母细胞的染色体构成，从而应用于女性染色体易位患者的植入前遗传诊断。     

体外受精-胚胎移植后双侧输卵管妊娠的诊治

[目的]探讨体外受精与胚胎移植(IVF-ET)术后双侧输卵管妊娠诊断和治疗方法.[方法]2001年1月-2005年12月中山大学附属第一医院生殖医学中心行IVF-ET术后双输卵管妊娠5例患者的临床资料进行分析.[结果]体外受精与胚胎移植术后双输卵管妊娠患者行腹腔镜检查及开腹盆腔探查手术前诊断均为单侧输卵管妊娠,在术中探查才确诊.[结论]体外受精与胚胎移植术后双输卵管妊娠术前明确诊断较困难,术中应探查双侧输卵管及卵巢情况.     

冷冻保存时长对卵裂期胚胎组蛋白表观遗传修饰的影响

【目的】研究不同的冷冻保存时长对人类卵裂期胚胎的组蛋白表观遗传修饰的影响。【方法】采用经患者知情同意捐献用于科研的慢速冷冻的卵裂期胚胎,根据冷冻时长分为6、9和12年组,以新鲜胚胎为对照组,每组6枚捐献胚胎。采用细胞免疫荧光技术观察去乙酰化酶HDAC1、组蛋白（H3K9ac、H3K4me3、H3K9me3）的表达量在各组胚胎中的差异,并以单细胞RT-qPCR技术检测去乙酰化酶HDAC1、甲基化酶（SUV39H1、SET?DB1）、去甲基化酶KDM5A对应mRNA的表达量。【结果】4组胚胎的去乙酰化酶HDAC1、组蛋白（H3K9ac、H3K4me3和H3K9me3）的蛋白表达量无统计学意义的差异（P>0.05）。同时去乙酰化酶HDAC1、甲基化酶SUV39H1对应mRNA的表达量也无统计学意义的差异（P>0.05）。随着胚胎冷冻时长的增加,甲基化酶SETDB1对应mRNA的表达量有递增趋势,然而差异无统计学意义（P>0.05）。去甲基化酶KDM5A对应的mRNA的表达量也随冷冻时长的增加而增强,差异有统计学意义（P<0.05）。【结论】慢速冷冻保存时长对卵裂期胚胎的组蛋白（H3K9ac、H3K4me3和H3K9me3）的蛋白表达量无显著影响,甲基化酶（SUV39H1、SETDB1）对应的mRNA表达量没有明显影响;但随着冷冻保存时长增加,胚胎去甲基化酶KDM5A对应的mRNA表达量增加,有可能导致胚胎转录抑制程度增强。     

植入前遗传学诊断中心与其它中心合作模式的初步探讨

目的研究植入前遗传学诊断(PGD)中心接收外送标本进行诊断模式的可行性。方法回顾性对比分析外接标本与本中心同期地中海贫血PGD周期的诊断结果。结果外接标本与本中心的α地中海贫血和β地中海贫血患者的胚胎实验室指标无统计学差异(P0.05)。外接标本α地中海贫血患者的正常胚胎率、杂合子胚胎率、异常胚胎率、诊断失败率分别为27.92%、35.10%、36.98%、16.93%,本中心α地中海贫血患者的正常胚胎率、杂合子胚胎率、异常胚胎率、诊断失败率分别为27.10%、38.01%、34.89%、14.63%,两组间比较无显著性差异(P0.05);外接标本β地中海贫血患者的正常胚胎率、杂合子胚胎率、异常胚胎率、诊断失败率分别为30.48%、44.28%、25.24%、9.87%,本中心β地中海贫血患者的正常胚胎率、杂合子胚胎率、异常胚胎率、诊断失败率分别为25.71%、46.43%、27.86%、7.28%,两组间比较亦无显著性差异(P0.05)。结论外接标本经过当地生殖中心的处理,运输至我中心检测不会显著影响诊断结果,PGD诊断中心接收外送标本进行合作的模式是可行的。