谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质

茂原链轮丝菌Streptoverticilliummobaraense所产生的谷氨酰胺转胺酶发酵液通过抽滤、超滤、乙醇沉淀、离心和冷冻干燥,制得粗酶粉的酶活约为1033U/g.对粗酶研究发现,该酶的最适反应温度为52℃,最适pH为6.0;粗酶的pH稳定范围在4～8,温度稳定范围在20～40℃,离子强度对该酶的活性稍有影响.粗酶经CM 纤维素层析和SephadexG 75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检验蛋白质纯度,得到较弱的单一区带.其中,CM 纤维素层析的纯化倍数为4.5,收率质量分数约为78.8%;凝胶过滤层析纯化倍数为1.11,收率质量分数为50%;用凝胶过滤法测得谷氨酰胺转胺酶的相对分子质量为40092.     

重组大肠杆菌生产人血管抑素的发酵条件

对重组人血管抑素表达菌株pQE32 AGN的生长及产物表达规律进行了探索,确定了最佳发酵条件.培养温度为37℃,初始pH7.0,OD600为0.8～1.0时开始诱导,诱导持续时间为6h,诱导剂浓度为0.1mmol/L,最终目的产物达到菌体总蛋白的35%,rhAGN的表达量达到560mg/L.     

重组人血管抑素生产菌培养基优化的研究

用正交试验对血管抑素生产菌株E.coli pQE32-AGN的发酵培养基成分进行了优化，优化后的合成培养基组成为：无水葡萄糖1％，(NH4)2SO4 0．4％，NaCl 0．2％，KH2PO4 0．3％，K2HPO4 2％，MgSO4 0．01％，盐酸硫胺素0．4mg／L，核黄素0．1mg／L，盐酸吡哆醇0．6mg／L，D-泛酸0．3ml／L，硫酸亚铁30mg／L，硫酸锂30mg／L，硫酸锰25mg／L，醋酸锌20mg／L，硫酸铝9mg／L，优化后的生物量达到9．0g／L以上，比采用1．13培养基培养的生物量提高了一倍多。同时，优化培养基对工程菌目的蛋白的表达、溶解及复性未产生不利影响。     

基于透明质酸的靶向纳米探针的构建及体外抗肿瘤活性

以透明质酸（hyaluronic acid，HA）为药物递送载体，依次连接阿霉素（doxorubicin，DOX）、天然吲哚花青素染料IR808和过氧化氢酶（catalase，CAT），最后通过自组装得到具有抗肿瘤和荧光成像作用的纳米探针CAT@HA-DOX-IR808 NPs。利用紫外可见光分光度计、荧光分光光度计以及透射电子显微镜等对其进行表征，然后在溶液和细胞水平开展其荧光成像和抗肿瘤活性研究。实验结果表明：构建的纳米探针CAT@HA-DOX-IR808为均匀的近球形，尺寸约为75 nm。在pH 5.0和透明质酸酶环境中，DOX在前10 h的释放率达到80%以上。激光共聚焦结果显示，在CD44阳性细胞中，该纳米探针组展现出比游离药物组以及阴性细胞组更显著的荧光信号。细胞毒实验中，在CAT@HA-DOX-IR808 NPs + NIR组，只有大约40%的MDA-MB-231细胞在最高浓度的CAT@HA-DOX-IR808 NPs下存活。因此，纳米探针CAT@HA-DOX-IR808具有显著增强的抗肿瘤功效，在乳腺癌的体外成像和治疗中具有广阔的应用前景。