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目的构建受血糖调控的含葡萄糖-6-磷酸酶(G6p)启动子的定点突变胰岛素原基因真核表达载体.方法应用基因突变技术(重叠延伸拼接法)改变胰岛素原C肽两端的氨基酸序列,使之能被存在于大多数细胞中的furin酶所识别并剪切为成熟的胰岛素,新序列命名为INS/furin;应用基因重组技术将G6p启动子序列替代真核表达载体pIRES中的CMV启动子序列,并将INS/furin亚克隆至pIRES的多克隆位点B.结果SgfⅠ和Sac Ⅰ、XbaⅠ和NotⅠ两种组合的双酶切及特定引物测序均证实载体构建成功.结论带有G6p启动子的含定点突变胰岛素原基因的真核表达载体有望成为糖尿病基因治疗理想的候选载体. 相似文献
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目的建立糖尿病患者血清中IA-2自身抗体的检测方法.方法以原核表达的人IA-2融合蛋白作为抗原建立人血清IA-2抗体的固相酶联免疫吸附检测方法(ELISA),该方法经优化后用于糖尿病患者血清中IA-2抗体的检测.结果该文所建立方法的平均批内和批间变异系数分别为6.8%和7.7%;回收率为99.2%~105%.所测定的1型和2型糖尿病患者血清中IA-2抗体的阳性率分别为49%和3.6%.结论应用原核表达的人IA-2蛋白为抗原所建立的ELISA方法简单且可靠,为糖尿病患者血清中IA-2抗体的检测提供了条件. 相似文献
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受血糖调控的定点突变胰岛素原真核表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建受血糖调控的含葡萄糖-6-磷酸酶(G6p)启动子的定点突变胰岛素原基因真核表达载体。方法 应用基因突变技术(重叠延伸拼接法)改变胰岛素原C肽两端的氨基酸序列,使之能被存在于大多数细胞中的furin酶所识别并剪切为成熟的胰岛素,新序列命名为INS/furin;应用基因重组技术将G6p启动子序列替代真核表达载体pIRES中的CMV启动子序列,并将INS/furin亚克隆至pIRES的多克隆位点B。结果SgfI和SacI、XbaI和NotI两种组合的双酶切及特定引物测序均证实载体构建成功。结论 带有G6p启动子的含定点突变胰岛素原基因的真核表达载体有望成为糖尿病基因治疗理想的候选载体。 相似文献
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目的 应用基因工程技术表达甲状腺激素反应蛋白1(TRP-1)。方法 应用RT-PCR方法,从新生大鼠脑组织RNA中扩增编码TRP-1的cDNA片段,构建表达型重组质粒,经DNA序列分析确证后,在大肠杆菌中表达,以Western印迹来初步鉴定是否表达了目的融合蛋白,用亲和层析纯化融合目的蛋白,并以SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量。结果 所获特异PCR产物正确地重组入Pinpoint Xa-1表达载体中。Western印迹表明经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核细胞表达产生了目的融合蛋白,亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约23400的融合目的蛋白。结论 应用原核细胞表达体系成功地表达了TRP-1融合蛋白,为进一步研究其在脑发育中的所起的作用以及该蛋白的其它功能提供了可能。 相似文献
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目的观察长期体外培养大鼠胰岛在分泌功能、基因表达及免疫荧光组织化学染色法的动态变化。方法采用胶原酶灌注消化和nextran密度梯度离心分离、纯化获得大鼠胰岛,连续培养20 d,定期检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS);实时聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光组织化学染色法检测胰高糖素(Glu)、胰岛素、胰腺十二指肠同源盒基因(PDX)-1、葡萄糖转运蛋白(Glut)-2基因mRNA及蛋白水平的表达。结果连续培养胰岛的GSIS水平持续下降;但RT-PCR及免疫荧光显示随培养时间延长,胰岛内关键基因表达并未见明显减弱。结论长期体外培养大鼠胰岛的胰岛素分泌功能持续下降,并非由胰岛素含量减少所致,可能存在更深层次的原因。 相似文献
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目的 对ALINITY i免疫发光测定系统检测游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)和总三碘甲腺原氨酸(total triiodothyronine,TT3)的性能进行验证,并评估新型ALINITY i系统6点校准体系和传统ARCHITECT系统6点校准体系检测对两项甲状腺激素(FT... 相似文献
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