弓形虫P30基因-乳酸乳球菌重组质粒的构建及其表达

目的构建表达弓形虫昆山分离株P30基因的乳酸乳球菌表达载体L2-Ps-P30-T,并在乳酸乳球菌中表达P30蛋白。方法用BamHⅠ/XhoⅠ将P30从质粒pSK-P30中切出并克隆至质粒pSK-PsT,构建pSK-Ps-P30-T质粒;用PvuⅡ将表达元件-Ps-P30-T-从pSK-Ps-P30-T质粒中切出,以相同的酶切位点导入大肠埃希菌与乳酸乳球菌穿梭质粒pTRKL2,构建L2-Ps-P30-T质粒;通过电转化将L2-Ps-P30-T导入乳酸乳球菌中,以Western blot鉴定P30蛋白的表达。结果酶切及PCR鉴定质粒L2-Ps-P30-T构建正确,并在乳酸乳球菌中表达能被弓形虫病患者血清识别的分子质量单位为30ku的蛋白。结论重组载体L2-Ps-P30-T构建正确,电转化入乳酸乳球菌后能表达具有反应原性的P30蛋白。     

LAMP技术检测单纯疱疹病毒-2型的初步应用

目的建立一种对单纯疱疹病毒-2型(HSV-2)进行快速、高效、简便的LAMP检测方法。方法用病毒DNA提取试剂盒提取HSV-2基因组DNA,设计4条扩增HSV-2糖蛋白gG基因的LAMP引物,以灭菌水为阴性对照,进行LAMP,LAMP产物经电泳、酶切鉴定。将HSV-2 DNA作10倍系列稀释后进行LAMP,检测其敏感性。结果HSV-2 LAMP产物电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组无扩增条带。LAMP产物的特异性通过限制性内切酶得到了证实。LAMP检测HSV-2的敏感性为0.01 ng/μL。结论检测HSV-2的LAMP方法特异、敏感、简便。     

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型的建立

目的采用SD大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocystis Carinii pneumonia,PCP)动物模型。方法 20只SD大鼠随机分成实验组和对照组。实验组皮下注射地塞米松2.5 mg/只,每周2次,对照组不给药。8周后,分别取肺组织,印片,Giemsa染色检查卡氏肺孢子虫滋养体和包囊。酚氯仿法提取大鼠肺组织DNA,LAMP法扩增卡氏肺孢子虫DNA。结果诱导后24 d大鼠出现死亡,28 d检获PC,32 d感染阳性率为86%(13/15);LAMP扩增出卡氏肺孢子虫特异DNA。结论成功诱导SD大鼠的PCP模型。     

环介导等温扩增技术检测单纯疱疹病毒Ⅰ型的应用

目的建立一种用于检测单纯疱疹病毒-Ⅰ型（HSV-1）的环介导等温扩增技术（LAMP）检测方法。方法用病毒DNA提取试剂盒提取HSV-1基因组DNA。设计4条扩增HSV-1糖蛋白gG基因的LAMP引物,对HSV-DNA进行LAMP,扩增产物进行琼脂糖电泳和酶切鉴定（试验设HSV-2、HPV-6、HPV-11、沙眼衣原体对照和阴性对照）;并对3例临床标本进行LAMP检测。结果 HSV-1 LAMP产物电泳后呈LAMP特征性条带,对照组无扩增条带;扩增产物AvaⅠ酶切片段大小分别为182、140和62 bp,与理论值相符。用HSV-1 LAMP引物扩增3例口唇疱疹标本,2例标本出现LAMP条带,1例标本未扩增出条带。结论建立的LAMP方法简便、高效、快速,可用于HSV-1感染检测。     

双酚A对SD大鼠卵巢毒性作用实验研究

目的初步探讨不同剂量双酚A对SD大鼠卵巢的毒性作用。方法实验将48只4周龄SD雌性大鼠随机分四组,分别予以不同剂量BPA灌胃染毒,隔日一次,染毒180 d。用酶联免疫法测定雌二醇（E2）、孕酮（P）、睾丸酮（T）3种主要激素水平值。取大鼠卵巢组织固定切片,做HE染色;用免疫组化方法检测雌激素受体ER和P53在大鼠卵巢中的分布及表达。结果与对照组比较,各染毒组大鼠血清中雌二醇（E2）和孕酮（P）水平值增高,睾丸酮（T）水平值降低,并随染毒剂量的增高而降低,呈负相关。病理组织切片显示卵泡颗粒层排列有明显的改变;免疫组化结果表明：ER和P53在SD大鼠卵巢细胞中的表达增强,呈现出剂量-效应关系。结论 BPA对SD大鼠具有内分泌干扰作用,可改变SD大鼠血清中雌二醇（E2）、孕酮（P）、睾酮（T）的正常水平值,增强卵巢中ER和P53的表达,影响SD大鼠卵巢细胞的正常增殖。