神经营养因子mRNA在损伤肝组织中的表达

目的 :检测大鼠肝脏损伤后 3种神经营养因子的mRNA表达的规律 ,为进一步探讨肝脏再生的分子机制提供新线索。方法 :提取成年大鼠部分肝切除后再生肝中的总RNA ,利用半定量RT -PCR法分析BDNF ,GDNF和FGF - 2基因在不同时间点的表达水平和变化规律。结果 :GDNFmRNA在正常时几乎检测不到 ,部分肝切除后 ,其表达水平明显上升。BDNF和FGF - 2的mRNA水平在手术后也同样有显著的升高。结论 :以上结果表明 ,这三个神经营养因子可能参与了肝再生的过程。     

兔肾上腺髓质在帕金森氏病模型鼠的脑内移植

将成年健康兔和大鼠的肾上腺髓质细胞移植至帕金森氏病大鼠模型的右侧侧脑室内。移植2个月后,兔肾上腺髓质移植组和鼠肾上腺髓质移植对照组分别有10只和5只动物的旋转行为得到明显改善。对这些旋转行为改善的动物均进行了脑的组织学检查。儿茶酚胺细胞的荧光组化法检查表明所有15只动物均见有含儿茶酚胺细胞的移植物,其中有些细胞仍保持正常细胞的形态特征,而另一些细胞则伸出粗短的突起。酪氨酸羟化酶抗体的免疫细胞化学染色显示有许多阳性细胞散布于移植区中,这些细胞多为圆形,无明显突起,部分为多形性细胞,有粗短突起出现。在尼氏染色的切片上没有发现淋巴细胞浸润的征象。以上结果表明移植的兔及大鼠肾上腺髓质细胞在帕金森氏病模型鼠脑内存活良好。本实验提示种系交叉的肾上腺髓质脑内移植是有可能的。     

胎脑移植治疗脑外伤瘫痪

目的：探讨胎脑移植对脑外伤瘫痪的效果。方法：以机械性脑外伤瘫痪模型鼠观察伤后2周行胎脑移植鼠术后病理学及脑电功率谱变化，并与无移植外伤及正常鼠比较。9例脑外伤后遗瘫痪患接受同种异体胎脑移植，并与4例按常规治疗的类似病人对照。结果；随访观察显示移植病人肢体瘫痪均有不同程度恢复，头颅CT及脑电功率谱亦明显改善。结论：实验和临床结果均提示胎脑移植对脑外伤后遗瘫痪有一定疗效。     

SKF83959调节纹状体星形胶质细胞FGF-2的合成和分泌

背景：星形胶质细胞与神经元之间的营养支持和信息对话被越来越多的学者所认同。越来越多的证据表明，纹状体星形胶质细胞表达多种多巴胺受体亚型。本实验室最近的研究显示，通过多巴胺受体可以调节纹状体星形胶质细胞分泌FGF-2，并促进体外培养的多巴胺神经存活。本研究旨在探讨是否存在有别于上述路径的调节FGF2产牛的其它方式。     

抗人Glypican3N端融合蛋白单克隆抗体研制及特性鉴定

目的:制备抗人磷脂酰蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定.方法:以纯化的GPC3 N端融合蛋白免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人GPC3N端mAb并进行纯化.经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚类和效价.结果:获得2株可稳定...     

血清glypican 3 ELISA检测法的建立及初步应用

目的 建立血清中磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3,GPC3)的双抗体夹心ELISA检测法,并探讨其应用价值.方法 以本室自制抗GPC3单克隆抗体为包被抗体,以兔抗人GPC3抗体为检测抗体,建立检测GPC3的双抗体夹心ELISA法.对建立的方法进行线性范围、灵敏度、精密度、回收率等方法学评价,并用于测定原发性肝...     

GST-p43/AIMP1融合蛋白表达和纯化以及与NF-L的相互作用

目的 构建人p43/AIMP1蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化,通过GST-pull down方法验证其与神经中间丝轻链(NF-L)的体外直接相互作用.方法 以重组质粒pcDNA3.1-p43为模板,扩增p43/AIMP1基因,产物经纯化回收后与原核表达载体pGEX4T-1连接构建成新载体GST-p43/AIMP1,经鉴定完全正确后转化大肠埃希菌B.21(DE3),通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,并纯化获得目的蛋白;将myc-NF-L体外转染HEK293T细胞,利用GST pull-down原理和方法验证人p43蛋白与神经中间丝轻链蛋白NF-L之间的相互作用.结果 酶切鉴定和测序结果显示,成功构建了GST-p43/AIMPI融合蛋白原核表达载体;考马斯亮蓝染色和Western blotting结果显示,成功获得有生物活性的GST-p43/AIMPI融合蛋白;GST pull-down实验结果证实,p43/AIMP1与NF-L存在直接相互作用.结论 获得有生物活性的GST-p43/AIMP1蛋白,并成功应用GST pull-down方法证实p43/AIMP1与NF-L在体外存在直接的相互作用.     

衰老的自由基学说与抗衰老中药的研究

文章综述自由基的机体衰老过程中的作用，并介绍了中药在清除自由基，防止衰老方面的研究情况。     

GST-Glypican 3 N端融合蛋白表达载体构建及表达纯化

目的构建人磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达及纯化。方法以重组质粒pcDNA3.1-GPC3N为模板,扩增GPC3 N端基因,产物经纯化回收后与载体PGEX-4T-1连接并转化大肠埃希菌Rosetta,酶切鉴定序列完全正确者诱导表达GST-GPC3 N端融合蛋白,并以谷胱甘肽琼脂糖小珠亲和纯化。结果Glypican 3 N端基因片段成功插入载体PGEX-4T-1,插入位点及碱基序列完全正确,转化Rosetta后,经IPGT诱导成功表达分子质量为64 000的GST-GPC3 N端融合蛋白。结论成功建立了重组GST-GPC3 N端融合蛋白的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法,为GPC3 N端融合蛋白的进一步应用打下基础。     

人磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白多克隆抗体制备及鉴定

目的：制备人磷酯酰蛋白聚糖3（Glypican3,GPC3）N端蛋白的多克隆抗体。方法：在大肠埃希菌Rosetta中诱导表达磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白,从SDS-PAGE中切胶纯化,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体。用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用ELISA、Westen-blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果：成功制备了抗磷酯酰蛋白聚糖3N端的多克隆抗体,抗体滴度为1：64000,经Western blot检测特异性良好。结论：成功制备了抗人磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白多克隆抗体。