RNAi-DNA稳定表达载体的构建与应用

目的:构建siRNA的DNA稳定表达载体,为研究RNAi在哺乳动物内持续、稳定抑制靶基因表达奠定基础。方法:合成含靶向hTERT基因的siRNA转录模板的发夹结构,将载体质粒pGenesil-1用BamH1 HindIII进行双酶切后,T4DNA连接酶连接成重组质粒,转染到肝癌SMMC-7721细胞中进行稳定筛选、表达,检测稳定筛选前后hTERT基因表达变化。结果:重组质粒在大肠杆菌菌株JM109内扩增。提纯、纯化后用HindIII、EcoRI酶切鉴定及测序鉴定证明hTERT-siRNA转录模板完整、正确的插入到pGenesil-1质粒中,建立了稳定抑制hTERT基因的SMMC-7721细胞株,并在mRNA水平抑制了肝癌SMMC-7721细胞hTERT基因表达。结论:成功构建了siRNA-DNA稳定表达载体,能在哺乳动物细胞中表达,并初步应用于靶基因的抑制。     

高龄股骨颈骨折人工髋关节置换术的护理体会

随着现代医学和科技的发展,人工髋关节技术越来越成熟,人工髋关节置换术已成为治疗某些老年人髋关节疾患,重建髋关节功能的常用治疗手段。我院2002年2月-2009年2月对28例人工髋关节置换术患者有针对性地实施了康复护理,取得满意效果,现报道如下。     

SiRNA稳定抑制肝癌细胞hTERT基因的表达

目的：利用RNA干扰稳定筛选-抑制技术,抑制人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达,探讨靶向hTERT基因RNAi与抑制肝癌细胞增殖的时-效关系．方法：设计靶向hTERT基因的小干扰RNA,构建重组表达质粒pGenesil—shRNA—hTERT并导入肝癌SMMC-7721细胞株,经G418筛选,建立稳定表达siRNA—hTERT的细胞株．采用real—time RT—PCR、MTF和PCR—TRAP法同时检测pGenesil—shRNA-hTERT稳定抑制组和未处理SMMC-7721细胞组hTERT基因表达、端粒酶活性及细胞增殖变化．结果：在稳定表达pGenesil—shRNA—hTERT的SMMC-7721细胞株中,RNAi效力持续、稳定存在,hTERTmRNA表达、端粒酶活性明显降低,瘤细胞增殖被抑制．结论：RNA干扰能持续、稳定地抑制靶基因hTERT mRNA表达及肿瘤细胞增殖,是有潜力的基因治疗肿瘤新方法．     

组织纤溶酶原激活剂、肝素抑制人工晶体表面细胞学反应的实验对比研究

目的：探讨ｔＰＡ（组织纤溶酶原激活剂）、肝素对人工晶体（ＩＯＬ）表面细胞学反应的抑制作用。方法新西兰大白兔３６只,分别ｔＰＡ、肝素及对照共三组,作晶体囊外摘除及人工晶体植入术。术中分别应用含ｔＰＡ（２５μｇ／０．２ｍｌ）、肝素（１００ＩＵ／ｍｌ）和平衡盐溶液的灌注液。术后１、３、７天和１月各时段取出人工晶体,光学显微镜下观察人工晶体表面的细胞学反应情况,用ＳＡＳ软件包行方差分析。结果ｔＰＡ和肝素组