人参皂苷Rg3立体异构体差异抑制糖尿病调控基因蛋白-PXR机制的分子动力学研究

目的：为进一步了解Rg3对映体的立体化学选择性,对PXR配体结合结构域（PXR ligand-binding domain,PXR-LBD）中20（R/S）-Rg3的结合模式进行建模。方法：使用计算对接,分子动力学（molecular dynamics,MD）和基本动力学分析（essential dynamics analysis,EDA）等技术手段进行建模。结果：PXR中20（S）-Rg3的MM / PB-SA估计结合能大于20（R）-Rg3。两种配合物的RMSFs表明,20（S）-Rg3结合的LBD的迁移率比20（R）型对映体的迁移率降低得多。EDA预测和两个复合物的叠加三维结构都表明20（S）-Rg3在PXR中的结合比20（R）-Rg3更可能与生物学结果一致。结论：以上结果表明,基于目前的模拟结果,PXR中20（S）-Rg3的结合模式比20（R）-Rg3更有可能与生物实验结果吻合。     

唑来膦酸影响单个核细胞向破骨细胞分化及RANK表达的研究

目的 研究唑来膦酸(zoledronate,ZLN)对破骨细胞分化及相关信号分子组织蛋白酶K (capthsin K)、细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor kappa-B,RANK)表达的影响,初步探讨唑来膦酸对破骨细胞分化的影响和机制。 方法 采用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化。在诱导开始时即分成2组:G1组为空白对照组,采用50 ng/ml RANKL诱导;G2组为实验组,从诱导开始就加入1×10-6 mol/L唑来膦酸处理,诱导4 d后收获并进行抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色观察、计算破骨细胞数量并检测TRAP酶活性;采用Real-Time PCR和Western Blot分析组织蛋白酶K、RANK的表达水平。 结果 唑来膦酸组生成的TRAP阳性的破骨样细胞较对照组少且核的数目也较少,唑来膦酸组较对照组破骨细胞生成的数目下降[(62.0±10.2)%,P＜0.05];唑来膦酸组TRAP活性较对照组下降[(31.0±4.1)%,P＜0.05];唑来膦酸组的组织蛋白酶K、RANK基因表达较对照组分别下降[(78.0±4.2)%、(49.0±1.9)%,P＜0.05]。 结论 唑来膦酸通过抑制破骨前体细胞RANK的表达来抑制体外破骨细胞分化。      

分层缝合加带蒂大网膜包埋在食管良性破裂修补术中的应用

目的探讨采用食管黏膜、肌层分层缝合加带蒂大网膜包埋在食管良性破裂修补手术中的应用方法与价值。方法应用分层缝合加带蒂大网膜包埋修补食管良性破裂病人37例,均采用食管黏膜、肌层分层缝合及带蒂大网膜包埋。观察病人术后恢复情况,胸管留置时间,术后14～20天复查上消化道碘水造影结果,住院时间以及出院后随访情况。结果 37例病人术后平均住院时间23. 2天,1例病人术后出现瘘,其余病例均Ⅰ期愈合,随访6～24个月,无迟发瘘及食管狭窄。结论对于食管穿孔或自发性食管破裂病人,如术中发现胸腔、纵隔感染,食管组织水肿时推荐行分层缝合并应用带蒂大网膜移植进行包埋。     

低浓度槟榔碱杀螺作用的实验观察

采用WHO推荐的"杀螺剂实验室终筛法"中的浸泡法,将受试钉螺分为6组,分别投入浓度为0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L的槟榔碱溶液中,对照组溶液分别为2.0 mg/L的氯硝柳胺以及去氯自来水。经上述浓度槟榔碱作用1 h,钉螺的开厣率依次为55.6%、90.0%、92.2%、95.6%,附壁率均为0,氯硝柳胺对照组开厣率为13.3%,附壁率为1.1%,去氯水组开厣率及附壁率均为77.8%;槟榔碱作用24 h钉螺死亡率依次为91.2%、95.6%、84.4%、73.3%,氯硝柳胺对照组为100%,去氯水组为0。24 h内不同浓度槟榔碱组钉螺头足部软体均肿胀明显,对照组无肿胀。表明槟榔碱在极低浓度时即具有显著的杀灭钉螺作用,且能够抑止钉螺上爬附壁。     

基于甲羟戊酸途径的盐酸小檗碱体外抗肺癌细胞药效及机制

目的 探究盐酸小檗碱（BBH）通过甲羟戊酸（MVA）途径抗肺癌细胞的药效及机制。方法 以人源肺癌细胞A549与鼠源肺癌细胞LLC作为研究对象，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测BBH（10、20、30、40、50 μmol·L^-1）对2种肺癌细胞增殖的抑制作用（48 h）；然后采用细胞划痕实验检测BBH（40 μmol·L^-1）对A549与LLC细胞迁移能力的影响（24、48 h）；集落形成实验比较BBH（10、20、40 μmol·L^-1）给药下2种细胞的集落形成能力；试剂盒检测BBH（40 μmol·L^-1）对A549与LLC细胞中乙酰辅酶A（A-CoA）和总胆固醇（TC）含量的影响；运用AutoDock Vina软件对接BBH与MVA途径调控蛋白固醇调节结合原件蛋白2（SREBP2）；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测BBH（40 μmol·L^-1）对A549与LLC细胞中MVA途径9个相关mRNA［羟甲基戊二酸单酰辅酶A合酶1（HMGCS1）、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGCR）、甲羟戊酸激酶（MVK）、磷酸甲羟戊酸激酶（PMVK）、5-焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶（MVD）、法尼基焦磷酸合酶（FDPS）、角鲨烯单加氧酶（SQLE）、法尼基二磷酸法尼基转移酶1（FDFT1）、异戊二烯基二磷酸合酶1（GGPS1）］表达的影响；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测BBH（40 μmol·L^-1）对2种细胞中MVA途径3个基因（HMGCS1、HMGCR、FDFT1）的关键蛋白表达的影响；使用TCGA数据库分析HMGCS1、HMGCR、FDFT1与SREBP2的转录基因SREBF2在非小细胞肺癌（NSCLC）中的关系。结果 与空白组比较，BBH组A549与LLC细胞的增殖、迁移与集落形成能力均显著降低（P<0.01）；细胞的凋亡率显著升高（P<0.01）；分子对接表明BBH与SREBP2具有良好的对接活性；与空白组比较，BBH组MVA途径的代谢产物A-CoA与TC的含量均显著下降（P<0.01）；给药BBH后，A549与LLC细胞中MVA途径基因HMGCS1、HMGCR、MVK、PMVK、MVD、FDPS、SQLE、FDFT1、GGPS1 mRNA的表达降低（P<0.01），HMGCS1、HMGCR、FDFT1蛋白水平明显下降（P<0.05，P<0.01）。在NSCLC患者中，HMGCS1、HMGCR、FDFT1与SREBF2呈高度相关（R=0.54、R=0.57、R=0.48）。结论 BBH可抑制A549与LLC细胞的增殖、迁移与集落形成能力并促进细胞的凋亡，其原因可能与BBH结合SREBP2调控MVA途径有关。