肝癌细胞HepG2间的P-糖蛋白传递作用

目的 探讨肝癌细胞株HepG2细胞间是否存在P-糖蛋白(P-gp)的传递及P-gp与多药耐药基因(mdrl)的关系.方法 将pSUPER.neo+GFP质粒转染至HepG2细胞(命名为HepG2/GFP),并与阿霉素耐药HepG2细胞(命名为HepG2/ADM)混合培养.激光共聚焦显微镜观察肝癌细胞间P-gp的传递.免疫磁珠法分离混合培养细胞,收集原HepG2/GFP细胞(命名为HepG2/aqMDR),采用Western blot分析HepG2、HepG2/ADM、HepG2/GFP,HepG2/aqMDR细胞的P-gP表达水平,同时应用实时荧光定量PCR分析这些细胞mdrl mRNA的表达水平.多样本均数比较用单因素方差分析,进一步两两比较用SNK-q检验. 结果荧光显微镜下可见大量带绿色荧光的稳定克隆.激光共聚焦显微镜下见HepG2/aqMDR细胞以黄色荧光为主,而HepG2/GFP以绿色荧光为主,HepG2/ADM以红色荧光为主.Western blot检测结果显示HepG2/aqMDR细胞中P-gp表达水平低于HepG2/ADM,但明显高于HepG2/GFP(q＝35.07,P<0.05)与HepG2(q=36.87,P<0.05).实时荧光定量PCR结果显示,HepG2/ADM细胞中mdrl mRNA表达水平较高,而HepG2/aqMDR、HepG2、HepG2/GFP三组细胞中mdrl的mRNA表达水平差异没有统计学意义(F＝2.30,P>0.05).结论 P-gP可以从耐药肝癌细胞传递至敏感肝癌细胞,这一现象为进一步研究肝癌多药耐药机制提供了新的思路.     

抑制BCRP表达逆转肝细胞癌MDR的研究

目的：研究小片段RNA干扰对肝癌耐药细胞系HEPG2／ADM中BCRP基因及其蛋白产物BCRP表达的抑制作用和逆转其耐药性的效果。方法：构建针对BCRP基因pSUPER-RNAi质粒,转染肝癌耐药细胞HEPG2／ADM。通过RT-PCR和Western Blot在mRNA和蛋白水平评价RNAi对BCRP表达的影响。MTT法检测RNAi逆转HEPG2／ADM细胞耐药性的效果,按实验组和对照组细胞的半数抑制剂量（IC50）计算RNAi对各种细胞耐药倍数的改变。结果：在耐药肝癌细胞HEPG2／ADM中,RNAi明显抑制了BCRP mRNA和蛋白产物BCRP的表达水平,其表达仅为对照组细胞的22.55％和37.49％（P〈0.01）。在相同浓度化疗药物的作用下,RNAi组HEPG2／ADM细胞耐药性显著下降,对ADM的耐药逆转倍数为3.55倍。结论：针对多药耐药基因BCRP,RNAi具有强大的逆转肝癌耐药细胞HepG2多药耐药的作用,为从基因水平逆转MDR展示了良好的前景。     

幽门螺杆菌感染精准治疗研究进展

幽门螺杆菌(HP)感染是目前全球最常见的慢性细菌感染之一, 慢性胃炎、胃十二指肠溃疡等胃肠道疾病包括胃癌的发生发展都与HP感染密切相关。HP感染经验治疗导致抗菌药物耐药、不良反应大及依从性差。HP耐药、球形变以及质子泵抑制剂(PPI)等因素导致HP的根除率逐渐下降。基于表型药敏与耐药基因的检测合理选择抗菌药物, 改善药物不良反应, 提高患者依从性以及合理选择PPI等, 实施精准治疗, 可有效提高HP的根除率。本文就HP精准治疗相关的研究进展作一综述, 为临床HP的根除治疗提供参考。     

窄带成像放大内镜下胃小凹形态观察的临床价值

目的探讨窄带成像放大内镜(NBI)技术下胃小凹的形态分型及其临床价值。方法应用窄带成像放大内镜技术对113例患者进行检查,观察胃小凹形态,并于各不同形态处行活组织检查。结果 A、B型胃小凹主要见于慢性浅表性胃炎,C、D、E型胃小凹主要见于慢性萎缩性胃炎,D、E型胃小凹与肠上皮化生及异型增生密切相关。结论通过窄带成像放大内镜对5种胃小凹的形态观察可以推测病理组织学诊断,使镜下准确诊断胃黏膜萎缩、肠上皮化生及异型增生成为可能,以指导正确的治疗方法及内镜下随诊。     

结直肠息肉漏诊的多因素相关性分析

结肠镜检查被认为是检出结直肠新生物的金标准,但它并非完全准确无误,检查过程中各类病变的漏诊屡见报导,如何降低结肠镜检查中息肉的漏诊率是一个非常值得探讨的话题,但在此之前需要对结肠镜检查息肉的漏诊情况及与漏诊率相关的因素有一个清晰的认识。本文拟对本院结肠镜检查结直肠息肉漏诊率及其可能的相关因素作一回顾性分析,以针对性采取相应策略来降低息肉漏诊率。     

大肠息肉门诊内镜手术安全性及可行性研究

目的 探讨大肠息肉门诊内镜手术的安全性及可行性.方法 纳入我院近2年接受门诊内镜手术大肠息肉患者2426例作为研究组,同期接受住院内镜手术大肠息肉患者2083例作为对照组,两组最大息肉直径不超过1.0 cm.对比两组治疗留院时间、诊疗费用、患者满意度及出血、穿孔、死亡等并发症发生率.结果 研究组留院时间、诊疗费用均显著...     

脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A

Objective Major histocompatibility complex class I Crelated molecules A and B(MICA and MICB) are innate immune system ligands for the NKG2D receptor expressed by natural killer cells and activated CD8(+)T cells.Our previous study showed that 5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-dC),a DNA methyltransferase inhibitor,can induce the expression of MICB and sensitized cells to NKL-cell-mediated cytolysis.The aim of this study was to determine the expression level of MICA in HepG2 cells(an HCC cell line)and L02 cells(a normal liver cell),and to investigate the effect of 5-aza-dC on MICA expression in HepG2 cells.Methods Cells were treated with 5-aza-dC,caffeine and ATM-specific siRNA.The cell surface MICA protein on HepG2 cells and L02 cells was determined using flow cytometry.The mRNA level was detected using realtimeRT-PCR.Result MICA was undetectable on the surface of L02 cells,but was highly expressed on HepG2 cells.MICA expression was upregulated in response to 5-aza-dC treatment(P＜0.05),and the upregulation of MICA was partially prevented by pharmacological or genetic inhibition of ataxia telangiectasia mutated(ATM)kinase(P＜0.05).Conclusion Our data suggest that 5-aza-dC induces the expression of MICA by a DNA damage-dependent mechanism.     

黏膜下隧道技术在NOTES手术中应用的动物实验研究

<正>经自然腔道内镜手术(NOTES)是指经口、阴道、结肠、膀胱等自然腔道置入软性内镜到达腹腔,在内镜下完成手术操作,实现对腹腔、盆腔疾病的微创治疗。其具有术后体表无瘢痕、术后疼痛轻、微创、美观、住院时间短、麻醉风险小、费用低等优点[1]。但目前还存在一些问题,其中最关键的环节是NOTES入路的建立和关闭问题[2]。经胃壁是目前研究最多、经验最成熟的NOTES手术入路之一。     

大肠息肉电子结肠镜检查漏诊率及相关因素分析

目的:探讨结肠镜检查中息肉的漏诊情况及相关因素。方法:选择再次肠镜检查并行肠镜下息肉切除者250例,计算其息肉患者漏诊率及息肉漏诊率,分析临床数据以及相关因素之间的关系。结果:250例患者共发现息肉743枚,其中有76例漏诊息肉共计144枚。息肉患者漏诊率为30.4%(144/250),息肉总体漏诊率为19.39%(144/743);息肉漏诊率与息肉大小(χ2=106.6,P<0.05)、山田分型(χ2=19.15,P<0.05)显著相关;炎性、腺瘤性、潴留性等多种病理类型息肉都存在一定程度漏诊。结论:大肠息肉在肠镜检查中存在一定程度的漏诊,漏诊率与息肉大小、形态有关,小的扁平息肉最易漏诊,不同肠段息肉漏诊率未见差异。     

红景天甙对HSC—T6细胞株Rho／ROCK信号通路影响的研究

目的:观察红景天甙对大鼠肝星状细胞株HSC-T6细胞增殖活化、胶原合成、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶-I(Rho associated coiled coil forming protein kinase-Ⅰ,ROCK-Ⅰ)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(Tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1)表达的影响并以ROCK特异性抑制剂Y-27632作为阳性对照,探讨红景天甙抗肝纤维化作用的分子机制.方法:MIT法检测HSC-T6细胞生长增殖;酶联免疫吸附(ELlsA)法检测HSC-T6 细胞上清Ⅰ型胶原含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、ROCK-Ⅰ、TIMP-1mRNA的表达;Western blot 检测细胞α-SMA、ROCK-Ⅰ、TIMP-Ⅰ蛋白表达.结果:MTT检测显示红景天甙和Y-27632对HSC-T6细胞的生长增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖性;ELISA结果提示红景天甙和Y-27632可抑制HSC-T6细胞I型胶原的分泌;Real-time PCR和Western blot结果表明红景天甙和Y-27632均能下调HSC-T6细胞ROCK-Ⅰ、TIMP-1和α-SMA的表达.结论:红景天甙可抑制HSC-T6细胞活化增殖.减少其Ⅰ型胶原分泌,其机制可能与抑制HSC-T6细胞的Rho/ROCK信号通路有关.