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目的利用原核基因工程生产有诱骨活性的骨形态发生蛋白-4(BMP-4). 方法应用RT-PCR技术,从成熟人的胎盘组织中扩增出长0.34Kb编码人骨形态发生蛋白-4成熟肽的基因序列,经测序证实后,装入表达载体pET-22b,诱导表达后SDS-PAGE显示在14kd处有一明显的表达条带.经初步鉴定,证实表达蛋白部分位于裂菌处理后的上清中,部分以包涵体的形式存在于沉淀中.将沉淀中的包涵体蛋白纯化、变性和复性处理,和上清中的蛋白分别经真空冷冻干燥后,植入小鼠的肌肉内检测蛋白活性. 结果第14d和21d,组织切片可见骨细胞和骨基质的形成. 结论大肠杆菌表达的BMP-4经复性处理后具有诱骨活性. 相似文献
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抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白在荷瘤裸鼠体内的预定位显像 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究^153Sm-生物素和抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白(CEA ScFv-core-streptavidin)在荷人直肠癌裸鼠体内的两步法预定位显像和体内分布。方法:对23只荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEA ScFv-core-streptavidin进行预定位,24h后腹腔注射^153Sm-生物素,其中20只于1、4、8和24h进行体内分布研究,余3只于8和24h进行定位显像。结果:在荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEA ScFv-core-streptavidin预定位后24h,注射^153Sm-生物素后1h,肿瘤/血比值为0.49,4和8h达1.21和1.56,24h达最高,为3.09。裸鼠定位显像示,8h肿瘤部位放射性明显浓聚,24h本底明显降低,肿瘤呈放射性“热“区。结论:^153Sm-生物素和CEA ScFv-core-streptavidin预定位显像能提高靶/非靶比值,缩短显像时间,改善图像质量。 相似文献
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BMP-4cDNA的克隆表达及活性的初步测定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:利用原核基因工程生产有诱骨活性的骨形态发生蛋白-4(BMP-4),方法:应用RT-PCR技术,从成熟人的胎盘组织中扩增出长0.34Kb编码入骨形态发生蛋白-4成熟肽的基因序列,经测序证实后,装入表达载体pET-22b,诱导表达后SDS-PAGE显示在14kd处有一明显的表达条带,经初步鉴定,证实表达蛋白部分位于裂菌处理后的上清中,部分以包涵体的形式存在于沉淀中,将沉淀中的包涵体蛋白纯化,变性和复性处理,和上清中的蛋白分别经真空冷冻干燥后,植入小鼠的肌肉内检测蛋白活性。结论:第14d和21d,组织切片可见骨细胞和骨基质的形成,结论:大肠杆菌表达的BMP-4的经复性处理后具有诱骨活性。 相似文献
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幽门螺杆菌HspA和UreB双价侯选疫苗株的构建 总被引:12,自引:1,他引:11
目的 构建表达幽门螺杆菌的组成成分热休克蛋白A亚单位(HspA)和尿素酶B亚单位(UreB)的重组蛋的白质的侯选菌株。方法 用PCR方法从幽门螺杆菌的染色休DNA上分别扩增出HspA和UreB基因片段,将它们融合插入原核表达载体pET-23b(+)中,并在BL21(DE3)大肠杆菌表达。结果 经测序,HspA-UreB(HU)事例基因片段由2061bp组成,为编码687个氨基酸残基的多肽。SDS- 相似文献
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制备抗癌胚抗原 (CEA )单克隆抗体的单链抗体 ,在保留抗原抗体结合位点的同时有效降低抗体的分子量不仅可减少人抗鼠抗体反应 (HAMA ) ,而且适合放射免疫显像。为纯化及核素标记抗体 ,将单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合并在大肠杆菌得到高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为 41kD ,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。表明融合蛋白能特异性地与生物素结合 ,RIA表明表达产物具有结合其特异性抗原CEA的能力 ,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在 41kD处可见表达条带。说明表达物不仅能与生物素结合且能特异性地与CEA结合。 相似文献
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日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区cDNA核酸疫苗的研究 总被引:7,自引:2,他引:5
目的 为研究血吸虫性别特异性表达基因的核酸免疫特性。方法 本研究将所克隆的编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因保守区cDNA片段克隆到真核表达载体 pcDNA3中 ,得到的重组质粒直接免疫昆明系小鼠 ,感染血吸虫尾蚴 ,7周后剖杀小鼠冲虫 ,进行成虫和虫卵计数。结果 其减虫率为 32 4 % ,肝脏减卵率为 4 6 9% ,与对照组比较差异显著。结论 初步显示血吸虫抱雌沟蛋白基因DNA疫苗具有一定的核酸免疫保护功能 相似文献
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目的利用基因工程原理构建人胰岛素样生长因子I(IGF-I)全长基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-IGF-I.方法应用PCR方法从人肝细胞cDNA文库中提取人IGF-I全长cDNA序列,克隆入T载体pMD18中,经测序证实序列正确后,进行双酶切并定向插入真核表达载体pIRES2-EGFP中,利用双酶切、电泳和PCR证实插入片段的正确性.结果经测序证实,目的基因人IGF-I的全长基因序列被正确扩增;构建的真核表达载体经双酶切和PCR鉴定证实,hIGF-I被定向插入到真核表达载体pIRES2-EGFP的多克隆位点中.结论利用基因工程原理可以正确地构建人IGF-I全长基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-IGF-I. 相似文献
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目的获得生物活性更高的癌胚抗原(CEA)微型抗体用于放免显像。方法将抗癌胚抗原微型抗体基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中,经大肠杆菌DH10Bac体内转座,产生重组杆状病毒BacHT-VH-L,将其转染粉纹夜蛾(Tn-5B1-4)细胞,经扩增后在细胞内进行表达。结果SDS-PAGE分析结果表明,在Tn-5B1-4细胞中表达产生一条特异性蛋白质,其分子量为26kd左右;以Westem blot分析表明,该特异条带即为VH-L蛋白。RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH-L蛋白能特异性的结合CEA,较大肠杆菌表达物活性更高。结论昆虫细胞表达可制备生物活性更高的癌胚抗原微型抗体。 相似文献