超抗原SEB对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

[摘要] 目的 观察超抗原肠毒素B（SEB）活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义。方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞、RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应。结果与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖,而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCRVβ14亚族。SEB刺激的T细胞早期（8 h）出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达（P ＜0.01或P ＜0.05）。结论CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志。     

重症传染性非典型肺炎医院内感染的临床分析

目的:探讨重症传染性非典型肺炎(亦称严重急性呼吸综合征,serious acute respiratorysyndrome,SARS)病人医院内感染的诊断与治疗.方法:对44例重症SARS病人的临床资料进行回顾性分析.结果:44例重症SARS病人27例发生医院内感染,其中7例表现为持续发热,16例表现为体温降低再升高,仅4例体温低于37.5℃;27例白细胞超过10×109/L者26例,淋巴细胞分类小于0.20者21例;19例X线胸片呈现进展性表现,5例无明显变化,3例好转;各类标本中共分离出50株病原菌,真菌12株,占24%;所有病例予以通气辅助和肾上腺皮质激素、抗菌药治疗,35例治愈出院,9例死亡.结论:重症SARS病人医院内感染的发生率高,多表现为混合性内源性感染,痰细菌培养对早期诊断具有重要意义;应予强力广谱抗菌药治疗.     

严重急性呼吸综合征继发细菌和真菌感染的临床研究

广州呼吸研究所自2002年12月22日至2003年6月收治传染性非典型肺炎确诊患者91例。这种新型的传染病特别具有嗜肺性，在治疗实践中发现似乎容易合并肺部其他病原体的感染。本文就我所收治的SARS患者合并的细菌和真菌感染的特点作一分析。     

T淋巴细胞趋化因子受体5表达上调介导了肠毒素超抗原对肺动脉内皮的损伤

目的 观察革兰阳性菌肠毒素活化的T淋巴细胞(T细胞)对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)的损伤作用,初步探讨其损伤机制.方法 将葡萄球菌肠毒素B(SEB)活化后的T细胞上清加入HPAEC,检测内皮细胞趋化因子的分泌情况;用Transwell小室观察内皮细胞分泌的趋化因子对T细胞趋化的影响.用10 ng/ml SEB刺激的T细胞与HPAEC共培养,检测T细胞与内皮细胞的黏附率;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测内皮细胞凋亡情况.结果 不同浓度T细胞培养上清刺激的HPAEC都表现出趋化因子随刺激时间延长而释放增加的趋势,72 h后1×10-2、1×10-1、1×100T细胞中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1,ng/ml)分别为1.240±0.103、4.200±0.305、6.500±0.500,巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α,ng/ml)分别为0.210±0.015、0.287±0.012、0.531±0.037,正常T细胞表达和分泌因子(Rantes,ng/ml)分别为1.420±0.074、7.634±0.630、15.700±1.300,其中Rantes表现出早期(6 h)快速释放和后期(12、24、48、72 h)延迟释放的特点.与未经SEB作用的对照组相比,超抗原组的T细胞从Transwell小室上室趋化移动至聚碳酸酯膜的数量(个)显著增多(86.38±14.50比16.50±2.50,P＜0.01＝;与T细胞组比较,超抗原组24 h T细胞黏附率显著增加[(15.50±1.08)%比(1.60±0.22)%,P＜0.01＝,加入1 μg/ml甲基化Rantes组T细胞黏附率[(4.39±0.66)%]较超抗原组显著下降(P＜0.01＝;黏附到下层HPAEC的T细胞趋化因子受体5(CCR5)/CD4较100 ng/ml SEB诱导3 d的单个核细胞(PBMC)增加了约2.5倍,CCR5/CD8增加了约2.8倍;与正常培养的HPAEC组比较,超抗原组HPAEC细胞凋亡指数增加[(32.50±4.50)%比(3.50±0.50)%,P＜0.01＝.结论 SEB活化的T细胞增加了对HPAEC的趋化和黏附,进一步导致HPAEC的损伤;这种趋化作用的增强与SEB活化的T细胞表面CCR5表达上调有关.

Abstract：

Objective To observe the injurious effect of T cell activated by Staphylococcus enterotoxin B (SEB) on human pulmonary artery endothelial cell (HPAEC) and explore its possible mechanism. Methods HPAEC was cocultured with SEB-activated T cells supernatant, and the secretion of chemotactic factors from HPAEC was examined. The Transwell inserts was used in chemoattraction assays. After HPAECs were cocultured with T cells and 10 ng/ml SEB for 3 days, HPAEC damage was monitored by microscopy and the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) assay. Results Three kinds of tested chemokines showed a time-dependent increase in all supernatant of HPAEC incubated with different concentrations of T cells. After 72 hours, the monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1,ng/ml) in 1 × 10-2, 1 × 10-1 , 1× 100 T cell supernatant groups was 1. 240± 0. 103, 4. 200± 0. 305, 6. 500±0. 500, respectively, macrophage inflammatory protein-1a (MIP-1α, ng/ml) was 0. 210 ± 0. 015, 0. 287 ±0. 012, 0. 531 ± 0. 037, respectively, and Rantes (ng/ml) was 1. 420 ± 0. 074, 7. 634 ± 0. 630, 15. 700 ±1. 300, respectively. Rantes presented a two-phase secretion mode : in early 6 hours it increased swiftly, but relatively slow at 12, 24, 48, 72 hours. T cell adherent to polycarbonate membrane increased after SEB stimulation in superantigen group compared with control group without SEB stimulation (86. 38± 14. 50 vs.16. 50± 2. 50, P＜ 0. 01 ). When 10 ng/ml SEB activated T cell was cocultured with HPAEC, more of originally suspended cultured T cells adhered to HPAEC monolayer [(15. 50±1.08)% vs. (1.60±0. 22)%,P＜0.01], whereas the cell adhesion ratio decreased markedly in 1 μg/ml Met-Rantes group [(4. 39±0. 66)%, P ＜ 0. 01 ). FACs test of HPAEC-adherent T cell showed lymphocyte chemokine receptor 5 (CCR5)/CD4 and CCR5/CD8 increased over 2. 5 folds and 2.8 folds compared with 100 ng/ml SEB activated T cell. Cell death rate of HPAEC was increased when cocultured with SEB-activated T cell in superantigen group compared with HPAEC normal incubation group [(32. 50±4. 50)% vs. (3. 50±0. 50)%, P＜0. 01].Conclusion Increased chemoattraction and adherence of SEB-activated T cells to HPAEC could damage HPAEC; this effect was possibly due to up-regulation of CCR5 on T cell.     

MRSA呼吸系统医院感染的分子流行病学调查

目的对广州呼吸疾病研究所2001年7月～2003年3月间,金黄色葡萄球菌引起的呼吸系统医院感染进行病原学监测. 方法收集临床分离菌株,应用脉冲场凝胶电泳的方法(PFGE)进行分型,确定菌株亲缘关系,结合临床资料分析. 结果在各种呼吸道采集标本中共收集到76株金黄色葡萄球菌,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)68株,占金黄色葡萄球菌检出率89.47%,MRSA在我所病区中引起59例医院感染,属于暴发形式发病的有23例,属于聚集性发病的有19例,散发病例17例,PFGE分型表明,绝大多数MRSA属于同一型(A型)共有60株,其中A1亚型28株,A2亚型14株,A3亚型17株,A4亚型1株. 结论MRSA引起的呼吸系统医院感染十分严重,并主要由少数菌株的传播引起,及时采取有效措施控制MRSA的流行和播散非常必要.     

姜黄素对脓毒症小鼠急性肺损伤肾素-血管紧张素影响的研究

目的 :研究姜黄素对脓毒症小鼠急性肺损伤(acute Lung injury,ALI)的保护作用,探讨其作用机制。方法:动物随机分为手术组、假手术组、姜黄素组、卡托普利组和正常对照组,盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立动物模型,利用光镜观察肺部组织形态学变化,称重法计算湿/干比(W/D),ELISA法检测血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平,RIA法测定肺组织和血中AngⅡ的量。结果:与手术组比较,卡托普利(ACE拮抗剂)和姜黄素均可以使ALI/ARDS小鼠的氧合指数(259.5±24.2、268.8±21.5 vs 194.3±23.9)和W/D(5.35±0.25、5.13±0.59 vs 6.08±0.64)得到改善,都能不同程度地抑制体内AngⅡ的生成(肺:1.58±0.16、1.65±0.21 vs 2.38±0.41;血:178.04±17.87、153.74±10.24 vs 213.38±25.44),降低炎症因子水平,减轻肺组织病理学损伤。结论:姜黄素对脓毒症ALI具有保护作用,至少通过抑制炎症和抑制RAS两个重要机制发挥肺保护作用。     

超抗原肠毒素B对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

目的 观察超抗原肠毒素B(SEB)活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义.方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞,RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应.结果 与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖;而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCR Vβ14亚族.SEB刺激的T细胞早期(8 h)出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达(P<0.01或P<0.05).结论 CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志.