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LHRH-PE40识别结肠癌细胞膜表面蛋白的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨人结肠癌细胞系Lovo及人白血病细胞系Jurket细胞膜表面蛋白能否识别LHRH-PE40及是否存在竞争性抑制。方法将结肠癌细胞系Lovo及白血病细胞系Jurket制备成细胞膜,利用125I标记的LHRH-PE40与两种细胞膜进行放射性配基分析,与LHRH进行竞争结合分析。结果人结肠癌细胞系Lovo的结合竞争符合特异性配基-受体结合、竞争;而白血病细胞系Jurket未见配基-受体特异性结合。其中LHRH-PE40与Lovo细胞的亲和力:Kd=10·6±2·33nmol/L,容量Bmax=345±7·59pmol/mg。结论LHRH是结肠癌免疫治疗的有效靶点,LHRH-PE40对过度表达LHRH受体的结肠癌具有特异性杀伤作用,而对无LHRH表达的肿瘤无杀伤作用,对于药物的临床应用有着指导意义。 相似文献
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目的:探讨一种新型免疫毒素LHRH-PE40与人结肠癌细胞系Lovo表面LHRH受体结合的特性,观察其对细胞增殖产生的抑制作用及检测细胞凋亡。
方法:用125Ⅰ标记法检测LHRH-PE40与Lovo结合的特异性; MTT比色法检测LHRH-PE40对胃癌细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
结果:人结肠癌细胞系Lovo细胞表面可见配基-受体特异性结合,LHRH-PE40对Lovo细胞的半数致死量为0.24 mg·L-1,0.1~10.0 mg·L-1LHRH-PE40作用于Lovo细胞,其凋亡明显(P<0.01)。
结论:结肠癌细胞Lovo细胞表面存在LHRH受体,LHRH-PE40对结肠癌细胞的增殖状态有明显的抑制作用及促凋亡作用。
LHRH-PE40,结肠肿瘤,细胞凋亡,受体;LHRH 相似文献
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已构建的能表达大肠杆菌肠毒素ST1—LTB融合蛋白的工程菌株BL21(DE3)(pXET-SLT1)及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原,免疫小鼠,结果免疫小鼠至少能抵抗1.5LD100的大肠杆菌强毒株C83902(K88ac,ST+,LT+)的攻击。用提取的包涵体免疫家兔后,采集的血清能够中和天然ST1的毒性。这表明构建的工程菌株BL21(DE3)(pXETSLT1)可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株。 相似文献
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目的从分离白英水提液得到的不同组分中筛选抑瘤作用的主要有效成分,对不同肿瘤细胞体外增殖的抑制作用进行验证,为研究其诱导细胞凋亡机制奠定基础。方法选取人宫颈癌细胞He La、人胃癌细胞BGC-823细胞为研究对象,用阳性对照药(5-Fu)及白英不同组分进行干预。CCK-8法检测药物抑瘤率,并计算IC50值,比较组间药效强度。HE、AO/EB染色及镜下观察给予不同浓度药物处理时细胞数目、形态和细胞凋亡情况的变化。结果白英提取物不同组分均有一定的抗肿瘤作用,其中皂苷元的抑瘤作用最强,以中剂量(0.067 6 mg/mL)效果最好,对2种肿瘤细胞抑瘤率分别达到86.21%和88.92%。结论白英提取物具有抑制肿瘤细胞增殖的活性,能诱导肿瘤细胞凋亡,实验组与阳性对照组比较,差异无统计学意义。 相似文献
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人白细胞介素2-Linker-PE38重组毒素的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建人白介素 2 linker PE38融合基因 ,为进一步表达具有特异性杀伤作用的融合蛋白奠定基础。方法 用PCR方法扩增绿脓杆菌外毒素 (PEA)衍生物PE38基因及柔性连接肽linker片段 ,并与人白介素 2 (Interleukin2 ,IL2 )基因连接插入质粒pET2 8a中。结果 构建的表达载体经核苷酸测序分析无突变发生。结论 成功地构建了表达质粒pIL2 linker Pe38。 相似文献
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目的为了验证重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(LHRH-PE40)对癌细胞的靶向性,对LHRH-PE40进行125I标记,并进行了与多种细胞受体结合试验和竞争试验。为该药物的导向治疗提供可靠的依据。方法利用体外细胞培养方法将人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo,人T细胞淋巴瘤Hut102,人白血病细胞系Jurket,狗肾细胞系DK 5种细胞系,分别大量培养至单层,收获细胞,破碎,制备细胞膜。同时制备鼠肺组织的细胞膜进行试验。利用125I标记的LHRH-PE40与不同细胞膜进行放射性配基结合分析,以及与LHRH竞争结合分析。确定这些细胞表面有无LHRH受体,并用Scatchard作图方法计算出其亲和常数及最大结合量。结果小鼠肺组织细胞膜、人T细胞淋巴瘤Hut102、人白血病细胞系Jurket、狗肾细胞系DK未见配基-受体特异性结合及竞争结果;而人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo与LHRH-PE40的结合竞争符合特异性配基-受体结合、竞争特性。其中LHRH-PE40与Lovo细胞的Kd=10.6±2.33 nmol/L,Bmax=345±7.59 pmol/mg;与BGC-823细胞的Kd=37.82±1.42nmol/L,Bmax=475±17.86 pmol/mg。结论受试的6种细胞膜蛋白中正常细胞(鼠肺、狗肾)和两种肿瘤细胞(Jurket、Hut102)表面无LHRH受体表达。而结肠癌和胃癌肿瘤细胞表面存在LHRH受体的表达。另外本试验还证实了重组毒素LHRH-PE40保留了天然LHRH与其受体结合的高亲和力。 相似文献
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具有GPX活性的单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析 总被引:3,自引:3,他引:0
目的利用分泌具有GPX活性的单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞3G5,克隆其mAb体的可变区基因。方法提取杂交瘤细胞的总RNA ,分离mRNA ,反转录合成cDNA。经PCR扩增VH 基因和VL 基因 ,将VH 基因和VL基因与载体 pGEM T连接后 ,进行酶切鉴定和序列分析。结果构建了2个分别含有VH 和VL 基因的重组质粒。序列分析表明 ,VH 和VL 分别属于mouscheavychainsubgroupIII和mouselightchainsubgroupV亚群 ,长度为372和324bp ,编码124和108个氨基酸 ,在高变区分别有4和2个丝氨酸。结论克隆的VH 和VL 基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征 ,为将来制备具有GPX活性的单链抗体提供了可靠的基因材料。 相似文献
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用限制性核酸内切酶EcoRI和HindⅢ双酶切含大肠杆菌肠毒素ST1—LTB融合基因的质粒pXSLT1,回收0.84kb的ST1—LTB融合基因,再将载体pET—28b(+)用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,然后将其与ST1—LTB融合基因连接,转化至受体菌BL21(DE3)中。经EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切反应鉴定重组子质粒,得到了理想重组质粒pXET-SLT1。重组菌株BL21(DE3)(pXETSLT1)经IPTG诱导后,其表达产物经SDS—PAGE和ELISA检测,结果表明重组菌株可以高效表达ST1—LTB融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的33.21%,而且无天然ST1生物毒性 相似文献