用酶联比色法测定肝脏磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D及其应用

研究建立一种磷脂酰胆碱专一性磷脂酶Ｄ（ＰＣ－ＰＬＤ）的酶偶联比色测定法，并研究肝脏中磷脂酰胆碱专一性磷脂酶Ｄ（ＰＣ－ＰＬＤ）活力受磷脂的调节及其人在肝癌中的变化。将ＰＬＤ水解脂酰胆碱产生的胆碱用胆碱氧化酶氧化，生成的Ｈ２Ｏ２再在过氧化物酶催化下将４－氨基安替匹林和酚氧化成粉红色有色物质（Ｔｒｉｎｄｅｒ反应）。结果：本法中酶深度２或反应时间和产物胆碱量有良好的正比关系。用０．１５％的正辛基β－吡喃葡     

全反式维甲酸对骨髓纤维细胞的影响

通过纤维细胞集落(CFU-F)的培养,观察了急性早幼粒细胞性白血病(APL)的CFU-F,结果APL 患者较正常骨髓明显低下(4.3±1.63/2×10~5细胞)(n=9);完全缓解后则上升达正常水平(12.4±2.55/2×10~5)。体外试验,维甲酸(RA)加入CFU-F 培养系后,CFU-F 下降为3.11±1.24/2×10~5细胞,明显低于对照组8.5±1.57/2×10~5(P<0.05)。提示RA 对骨髓纤维细胞有抑制作用,此结果可能为RA 治疗骨髓纤维化提供初步依据。     

人的可溶性L-selectin(sL-selectin)在杆状病毒载体系统中的表达与纯化

目的利用昆虫细胞杆状病毒系统表达人的重组可溶性L-型选择蛋白配体凝集素（human recombinant soluble L-selectin：sL-selectin），探索在真核细胞中高效表达人的重组可溶性L-型选择蛋白配体凝集素的新途径。方法将已经重组好的杆状病毒感染昆虫细胞，表达sL-选凝素于细胞培养上清，利用末端连接的ZZ-结构域（蛋白A来源的首尾相连的二聚化Z结构域）与IgG-琼脂糖-6的结合而分离纯化，通过SDS-PAGE鉴定分子量的大小，并用特异性抗体验证，另外通过重组的sL-选凝素与SMMC7721的黏附观察其活性。结果sL-选凝素可在昆虫细胞中表达，产物的分子量约为46000，与人肝癌细胞SMMC7721的结合率可达70％。结论sL-选凝素可通过杆状病毒载体在昆虫细胞中有效表达，分离纯化后依然保持生理活性。     

淋球菌MlaA重组蛋白表达及多克隆抗体的制备与应用

目的 原核表达、纯化淋球菌MlaA蛋白,制备并鉴定其多克隆抗体。方法 构建原核表达载体pET-28a-MlaA,转化BL21(DE3)大肠埃希菌,经IPTG诱导重组蛋白的表达。通过亲和层析法纯化目的蛋白,并进行Western blot鉴定。以纯化的重组蛋白作为抗原,与佐剂乳化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后取小鼠静脉血并分离血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定抗体效价,用Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)和流式细胞术(FCM)检测MlaA多克隆抗体的反应性和特异性。结果 Western blot显示,pET-28a-MlaA转化BL21后表达相对分子质量为35×10³的淋球菌MlaA重组蛋白。ELISA检测MlaA免疫小鼠血清抗体效价为1∶8 000～1∶32 000。Western blot、IFA和流式细胞术检测制备的抗体能识别淋球菌变性和非变性MlaA蛋白。结论 成功表达并纯化淋球菌MlaA重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,将制备的抗体血清作为一抗对淋球菌及其他不同类菌株进行Western Blot检测后发现,制备的多克隆...     

沙眼衣原体隐蔽性质粒分子流行病学调查与分析

目的：调查分析广州地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体隐蔽性质粒的分子流行病学。方法：设计合成隐蔽性质粒特定序列区域的特异性引物,半巢氏PCR扩增沙眼衣原体隐蔽性质粒DNA片段,同时结合ompl基因PCR扩增,比较分析质粒型。结果：143例沙眼衣原体ELISA检测阳性的标本,隐蔽性质粒内外引物扩增全部阳性,而ompl基因PCR扩增检出140例阳性。质粒分型为质粒完整型沙眼衣原体143株菌,未见质粒缺失型和无质粒型菌株。结论：广州地区尚未发现质粒变异型沙眼衣原体,有效地检测沙眼衣原体质粒分子流行病学状况对于实验室诊断和制定控制策略有重要的意义。     

维甲酸诱导HL-60细胞向粒细胞分化时蛋白激酶C的作用

RA诱导HL-60细胞向粒系分化时,伴随有PK-C活力的两次升高。第一次是细胞接触RA的第一天;第二次是接触RA的第四天。细胞形态学分化和NBT还原细胞生成的资料提示第一次PK-C活力升高可能是诱导细胞分化的关键步骤,后一次则可能是细胞诱导分化的结果。RA导致酶活力的变化主要在胞质组分。三氟哌嗪事先处理细胞,再经RA诱导则无PK-CS力的升高,细胞分化亦受抑制。对RA诱导HL-60细胞向粒系分化时PK-C的作用进行了讨论。     

四种细胞系培养沙眼衣原体易感性的比较

目的:比较McCoy、Hela、Vero、HaCat四种细胞培养沙眼衣原体的易感性及药物敏感性试验结果。方法:将5 000和1 000 IFU的衣原体分别接种到McCoy、HeLa、Vero、HaCat细胞中,培养48和72 h,通过碘染色和单克隆荧光抗体染色法,观察衣原体包涵体的数量。比较四种细胞对衣原体的易感性和两种染色方法的敏感性。培养McCoy和HeLa细胞,进行10株衣原体临床株对5种抗生素的药物敏感性试验,观察衣原体的最小抑菌浓度(MIC)。结果:在衣原体感染后48 h和72 h,比较McCoy、HeLa、Vero与HaCat细胞对沙眼衣原体的易感性,差异均具有统计学意义(P0.05)。在相同接种浓度下,碘染色观察McCoy和HeLa细胞中衣原体包涵体数量比HaCat细胞多,Vero细胞中包涵体数量最少;荧光染色时,McCoy和HeLa细胞中衣原体包涵体数量较多,HaCat细胞包涵体数量最少。衣原体感染48 h,碘染和荧光染色计数McCoy、HeLa和HaCat细胞内包涵体数量无明显差异(P0.05),Vero细胞具有明显差异(P0.05)。在McCoy和HeLa细胞中,5种抗生素对衣原体的最小抑菌浓度范围基本相同。结论:沙眼衣原体对McCoy细胞和Hela细胞有较高的易感性,碘染色观察Vero细胞中衣原体包涵体敏感性低,衣原体在McCoy和Hela细胞中的药敏试验结果一致。     

广州地区2000-2004年淋球菌对抗菌药物耐药性的变迁

目的监测广州地区2000-2004年分离的淋球菌对5种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),分析淋球菌的耐药趋势。方法采用纸片酸度法测定菌株是否产β内酰胺酶,采用琼脂稀释法测定淋球菌株对抗菌药物的MIC。结果共测定527株淋球菌,检出产β内酰胺酶淋球菌(PPNG)105株(19.9%),未见大观霉素和头孢曲松耐药菌株出现,但头孢曲松的低敏率由2000年的20%上升到2004年的66.1%,两者的MIC50和MIC90均在敏感范围。大观霉素的MIC90由8mg·L-1上升到32mg·L-1;青霉素、四环素、环丙沙星的MIC50和MIC90变化较大,且都超过了耐药标准,其耐药率分别由2000年的80%、88.6%、85.7%升至2004年的93.5%、93.5%和96.8%。结论2000-2004年期间大观霉素和头孢曲松对淋球菌敏感性较好,但后者的低敏率呈逐年升高趋势,两者仍可作为治疗淋病的首选药物;对青霉素、四环素和环丙沙星耐药率逐年增高,提示对淋病的治疗作用差。     

意义未定单克隆免疫球蛋白血症13年发展为多发性骨髓瘤一例

意义未定单克隆免疫球蛋白血症１３年发展为多发性骨髓瘤一例钱晓萍，王学文，应江山，吴兴中，刘海宁患者，女性，５０岁，因发现免疫球蛋白增高伴骨痛３个月于１９８０年１月５日入院。患者１９７９年１０月两上臂、左肩、两臀部骨痛，查血白蛋白／球蛋白（Ａ／Ｇ）４９...