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目的 构建含有心肌特异性基因肌球蛋白重链α(α-MHC)调控的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的载体并转染到小鼠胚胎干细胞(ESC),建立p α-MHC/EGFP小鼠ESC株,利用该细胞株可识别和纯化分化形成的心肌细胞. 方法 应用电穿孔技术将p α-MHC/EGFP载体转染到ESC,G418筛选10~12 d后收集G418抗性细胞克隆并采用悬滴法体外诱导向心肌分化.通过PCR扩增细胞克隆基因组EGFP片段,并在心肌分化过程中通过荧光显微镜观察EGFP的表达,鉴定p α-MHC/EGFP胚胎干细胞株的建立.细胞免疫组化法检测自发性搏动拟胚体(EB)中EGFP阳性区域心肌肌钙蛋白T的表达. 结果 G418抗性细胞克隆基因组中能够扩增EGFP片段;在心肌细胞分化过程中,荧光显微镜下能观察到EB局部出现自发性搏动的亮绿色细胞团;细胞免疫组化检测显示,EGFP阳性区域肌钙蛋白T表达阳性. 结论 成功构建了p α-MHC/EGFP胚胎干细胞株,该细胞株在分化为心肌细胞的同时表达EGFP,便于对心肌细胞进行识别和纯化. 相似文献
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氯化铝对大鼠脑组织胶质原酸性纤维蛋白和淀粉样β-白前体基因表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
为探讨铝和早老性痴呆(AD)及其他神经退行性疾病之间的关系及其作用机理,使用原子吸收,免疫组化和Northern印迹法等检测方法,观察饮用含铝饮水6个月的大鼠脑皮层中Al3+和淀粉样β-蛋白前体(β-APP695) mRNA及皮层和海马区胶质原酸性纤维蛋白(GFAP)的含量变化. 结果发现,AlCl3(7.4和14.8 mmol·L-1)在引起脑皮层中铝的含量明显增高的同时,皮层和海马GFAP免疫组化阳性指数升高,皮层β-APP695 mRNA的含量增加. 在饮水铝浓度为14.8 mmol·L-1时, β-APP695 mRNA的相对含量是对照组的2.5倍. 结果表明,长期铝接触可以 引起胶质细胞增生和β-APP表达的改变. 提示铝可能是AD等神经退行性疾患的一个致病或促发因素. 相似文献
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目的 观察神经调节蛋白-1(NRG-1)诱导小鼠胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化及扩增心肌细胞的作用.方法 分别观察ESCs自发及NRG-1诱导情况下心肌细胞分化率;RT-PCR检测心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5 mRNA及心肌骨架蛋白α-MHC、β-MHC mRNA的表达;细胞免疫组化检测心肌α-actinin蛋白表达;血管活性药物刺激观察心肌细胞的功能反应.结果 NRG-1诱导的心肌细胞分化率显著高于自发的心肌细胞分化率(P<0.05),且诱导生成的心肌细胞对肾上腺素能及胆碱能药物刺激呈现相应的频率反应,刺激前后搏动频率差异均有统计学意义(P<0.05);NRG-1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达,在NRG-1为100 ng/mL时表达水平最高,且两者的相对表达量明显高于自发分化组的相对表达量(P<0.05或P<0.01);NRG-1干预增加心肌细胞骨架蛋白α-MHC、β-MHC mRNA水平且增强α-actinin蛋白表达(P<0.05).结论 外源性NRG-1早期干预能够诱导ESCs向心肌细胞分化并扩增ESCs分化形成的心肌细胞. 相似文献
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【摘要】目的:通过分析膝关节骨关节炎软骨下假囊肿(OAPC)与膝关节稳固结构损伤的关系,探讨膝关节OAPC的形成机制。方法:对281例膝关节骨性关节炎患者和26例健康志愿者(对照组)行膝关节MRI检查。采用修订WORMS评分方法对每个膝关节的MRI表现进行评估,评分对象包括膝关节软骨、半月板、韧带及软骨下囊肿。对膝关节软骨下OAPC的出现率与膝关节稳固结构的损伤情况进行对比分析,并对与软骨下OAPC相关的关节内异常结构及可能的危险因素进行Logistic回归分析。结果:骨性关节炎组OAPC的出现率(43.4%)显著高于对照组(0%)。关节软骨和韧带损伤分别与OAPC的出现率呈正相关(r=0.238,P<0.001;r= 0.130,P<0.05)。股骨内、外髁及胫骨内、外髁软骨损伤时OAPC的出现率高(χ2=8.853,P=0.003;χ2=22.776,P<0.001;χ2=8.036,P=0.005;χ2=23.875,P<0.001)。经多因素Logistic相关分析,发现软骨损伤与OAPC的相关性最强,其次为半月板撕裂。结论:膝关节软骨损伤与软骨下OAPC相关性最强,可能与OAPC的形成机制有关。 相似文献
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蝙蝠葛碱(山豆根碱Dauricine)系防己科植物蝙蝠葛(Menispermumdauricum DC.)根茎中的一种酚性生物碱。产于我国的东北、华北、陕西、湖北等省。民间用它来治疗咽喉肿痛、扁桃体炎、慢性支气管炎等病症。近年来,经武汉医学 相似文献
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目的 观察神经调节蛋白-1(NRG-1)诱导小鼠胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化及扩增心肌细胞的作用.方法 分别观察ESCs自发及NRG-1诱导情况下心肌细胞分化率;RT-PCR检测心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5 mRNA及心肌骨架蛋白α-MHC、β-MHC mRNA的表达;细胞免疫组化检测心肌α-actinin蛋白表达;血管活性药物刺激观察心肌细胞的功能反应.结果 NRG-1诱导的心肌细胞分化率显著高于自发的心肌细胞分化率(P<0.05),且诱导生成的心肌细胞对肾上腺素能及胆碱能药物刺激呈现相应的频率反应,刺激前后搏动频率差异均有统计学意义(P<0.05);NRG-1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达,在NRG-1为100 ng/mL时表达水平最高,且两者的相对表达量明显高于自发分化组的相对表达量(P<0.05或P<0.01);NRG-1干预增加心肌细胞骨架蛋白α-MHC、β-MHC mRNA水平且增强α-actinin蛋白表达(P<0.05).结论 外源性NRG-1早期干预能够诱导ESCs向心肌细胞分化并扩增ESCs分化形成的心肌细胞. 相似文献
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重组人促红细胞生成素对小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的初步观察外源性细胞因子重组人促红细胞生成素(NEPO)对小鼠胚胎干细胞(ESC)向心肌细胞分化的影响。方法将NEPO加到细胞培养基中配成终浓度分别为0.5、1.O、5.0U/ml的诱导分化液,分别在分化第8、12天观察ESC自发及在rhEPO诱导情况下心肌细胞分化率;在分化第7天应用RT-PCR检测自发分化组及NEPO诱导组心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5mRNA的相对表达。结果在分化第8、12天rhEPO诱导(1.0U/ml)心肌细胞分化率分别显著高于对应分化天数的自发心肌细胞分化率(0.11±0.02对0.05±0.01,P〈0.05;0.86±0.02对0.65±0.05,P〈0.05);与自发分化组比较.NEPO干预(1.0U/ml)上调GATA-4、Nkx2.5mRNA的相对表达。结论外源性rhEPO早期干预能够促进ESC向心肌细胞分化。 相似文献