T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对黑素瘤TRP-2180-188肽疫苗刺激小鼠淋巴细胞的影响

目的 探讨体外T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（TIM-3）对与小鼠黑素瘤B16F10细胞共培养的酪氨酸相关蛋白-2（TRP-2180-188）抗原肽刺激小鼠淋巴细胞的影响。 方法 构建TIM-3重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2,分别转染重组质粒及空质粒pFUSE-mIgG2Aae1-Fc2至人上皮293T细胞,继续培养48 h,制备含TIM-3、免疫球蛋白（Ig-tail）的上清液。TRP-2180-188肽疫苗免疫C57BL/6小鼠,分离小鼠脾淋巴细胞,用TRP-2180-188抗原肽和白细胞介素（IL）-2刺激培养5 d,以未刺激细胞作为对照组。构建B16F10细胞与上述TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系,分为空白对照组（加293T细胞培养48 h上清液）、TIM-3组（加含TIM-3上清液）、阴性对照组（加含Ig-tail上清液）。CCK-8法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测共培养体系中干扰素（IFN）-γ和肿瘤坏死因子（TNF）-α浓度,流式细胞仪检测共培养体系中CD8+T淋巴细胞。 结果 酶切和测序鉴定证实目的基因正确插入真核表达载体中,检测到转染重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有TIM-3表达,转染空质粒pFUSE-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有Ig-tail的表达。CCK-8法检测显示24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组淋巴细胞增殖活力分别为（100.00 ± 10.42）%、（108.70 ± 9.90）%、（78.06 ± 6.37）%,48 h时分别为（100.00 ± 6.24）%、（168.00 ± 2.98）%、（42.93 ± 5.93）%;24 h、48 h时TIM-3组淋巴细胞活力低于空白对照组和阴性对照组（均P ＜ 0.05）。TIM-3组48 h相比24 h淋巴细胞增殖倍数低于空白对照组和阴性对照组（均P ＜ 0.05）。24 h时,空白对照组、阴性对照组、TIM-3组IFN-γ浓度分别为（216.44 ± 7.85）、（223.67 ± 7.79）、（192.96 ± 5.05） ng/L,48 h时分别为（230.06 ± 4.23）、（167.24 ± 3.33）、（54.95 ± 0.57） ng/L。24 h、48 h时,TIM-3组IFN-γ浓度低于空白对照组和阴性对照组（均P ＜ 0.05）。24 h、48 h时,TIM-3组TNF-α浓度低于空白对照组和阴性对照组（均P ＜ 0.05）。24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数分别为0.421%、2.22%、3.30%,48 h时分别为0.577%、0.691%、4.06%。24 h、48 h时TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数高于空白对照组和阴性对对照组。 结论 TIM-3在体外能够抑制B16F10细胞与TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系中淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ、TNF-α,提高CD8+T淋巴细胞。     

钠氢交换子调节因子-1及β-联蛋白在皮肤黑素瘤及痣细胞痣组织中的表达

目的 探讨皮肤黑素瘤及痣细胞痣组织中钠氢交换子调节因子-1 (NHERF1)和β-联蛋白表达的意义.方法 收集47例皮肤黑素瘤及37例痣细胞痣组织,用免疫组化方法对NHERF1和β-联蛋白在组织中的表达模式(膜表达、浆表达及核表达)和表达强度进行检测.结果 原位皮肤黑素瘤组织中NHERF1胞质中等/强阳性表达率为38％;而侵袭性皮肤黑素瘤组织中NHERF1胞质中等/强阳性表达率为71％,两组相比差异有统计学意义.同时,全部皮肤黑素瘤组织中NHERF1胞质中等/强阳性表达率为60％,而痣细胞痣组织中NHERF1胞质中等/强阳性表达率为0,差异有统计学意义.原位皮肤黑素瘤组织中可见β-联蛋白胞质中等/强阳性表达率为50％;而侵袭性皮肤黑素瘤组织中可见β-联蛋白胞质中等/强阳性表达率为84％.两组相比差异有统计学意义.全部皮肤黑素瘤组织中B一联蛋白胞质中等/强阳性表达率为72％,而痣细胞痣组织中NHERF1胞质中等/强阳性表达率为30％,两组相比具异有统计学意义.NHERF1及β-联蛋白胞质中等/强阳性表达率在痣细胞痣组、原位黑素瘤组及侵袭性黑素瘤组中均随着病变组织的恶性程度增加而升高.运用Spearman秩相关检验对皮肤黑素瘤中NHERF1及β-联蛋白的表达相关性进行分析显示无相关性.结论 NHERF1及β-联蛋白在痣细胞痣、原位黑素瘤及侵袭性黑素瘤组织中的胞质阳性表达随着病变组织的恶性程度增加而升高,但两者的表达差异无相关性.     

Cbl-b基因shRNA干扰载体的构建及鉴定

目的 构建小鼠Cbl-b基因RNA干扰（RNAi）的真核表达质粒,并初步鉴定其干扰效果,为后续研究Cbl-b在黑素瘤免疫治疗中的作用奠定基础。 方法 根据基因库提供的Cbl-b cDNA序列,设计并合成4对短发夹结构的互补DNA序列,克隆至载体PGPU6/GFP/Neo构建重组质粒,并予以DNA测序鉴定。重组干扰质粒构建成功后,将干扰质粒与Cbl-b过表达载体共转染293T细胞,于转染后48 h,通过实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测各质粒对Cbl-b基因的表达抑制效应。 结果 测序分析证实,4对shRNA寡核苷酸序列分别成功插入至shRNA真核表达载体PGPU6/GFP/Neo中,将构建成功的PGPU6/GFP/Neo-shRNA质粒与Cbl-b真核表达载体共转染细胞48 h后,通过荧光实时定量PCR法及Western 印迹测定,发现4条shRNA序列对Cbl-b的表达均有一定的抑制效应,其中以1号shRNA序列重组质粒对Cbl-b表达的抑制程度最高（P ＜ 0.05）。 结论 成功构建并筛选出沉默效应最高的Cbl-b shRNA真核细胞表达载体。     

松油烯-4-醇与α-红没药醇对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌协同抑菌作用研究

目的 探讨松油烯-4-醇(T4O)和α-红没药醇(Bis)对于金黄色葡萄球菌(S.aureus)和痤疮丙酸杆菌(C.acnes)的协同抑菌作用。方法 采用微量棋盘稀释法测定T4O、Bis联用时上述两种实验菌的最小抑菌浓度(MIC),并计算部分抑菌浓度指数(FICI)。对两种实验菌各设置MIC组(加入MIC的T4O、Bis)、2×MIC组(加入2倍MIC的T4O、Bis)及阴性对照组(不加T4O、Bis),绘制T4O、Bis联用时两种实验菌各组的时间-杀菌曲线,测定联用时两种实验菌各组的菌株表面Zeta电位(ZP)、细胞内核酸及蛋白质泄漏情况、细菌生物膜破坏情况以及S.aureus的呼吸链脱氢酶活性,透射电镜观察联用对两种实验菌各组菌株形态的影响。结果 T4O和Bis联用时S.aureus及C.acnes的FICI<0.5,其中T4O对S.aureus的MIC为0.62 g/L,对C.acnes的MIC为0.31 g/L;时间-杀菌曲线显示,联用可明显抑制两种细菌生长。与阴性对照组相比,联用时两种细菌的ZP均降低,细菌细胞内核酸、蛋白质泄漏增加,菌体丧失正常形态,细菌生物膜被破坏,...     

搔抓诱发或加重特应性皮炎的机制

特应性皮炎是一种慢性、复发性、炎症性皮肤病,临床表现为剧烈瘙痒,严重影响患者心身健康.近年来特应性皮炎发病率增加,然而其病因和发病机制尚未完全阐明,且无有效的控制方法.搔抓可能是重要的诱发和加重因素,可刺激角质形成细胞释放趋化因子及促炎症细胞因子而诱发瘙痒-搔抓循环,破坏皮肤屏障而易于发生微生物感染,导致自身抗原的释放.瘙痒-搔抓循环、微生物感染及自身抗原均在特应性皮炎的发病中起重要作用.通过外用保湿剂、戴棉手套、湿包疗法、心理干预及剪短指甲等方法可避免搔抓.     

原发性乳房外Paget病组织中钠氢交换子调节因子1和β联蛋白的表达和意义

【摘要】 目的 探讨钠氢交换子调节因子1（NHERF1）和β联蛋白在原发性乳房外Paget病组织中的表达及其意义。 方法 应用免疫组化方法,检测18例原位乳房外Paget病、22例侵袭性乳房外Paget病石蜡组织切片中NHERF1和β联蛋白的表达情况。 结果 NHERF1在22例侵袭性乳房外Paget病中18例（81.82%）为高表达,18例原位乳房外Paget病中7例（38.89%）高表达,两组差异有统计学意义（χ2 = 7.78,P ＜ 0.01）;β联蛋白在侵袭性乳房外Paget病中有0例胞膜高表达和18例（81.82%）胞质或核高表达,原位乳房外Paget病中分别为6例（33.33%）和8例（44.44%）,两组差异均有统计学意义（χ2值分别为8.63和6.08,P值分别 ＜ 0.01和 ＜ 0.05）。原发性乳房外Paget病组织中NHERF1的表达与β联蛋白胞膜表达呈负相关（ρ = -0.488,P ＜ 0.01）,与β联蛋白胞质或核表达呈正相关（ρ = 0.623,P ＜ 0.01）;β联蛋白胞膜表达与胞质或核表达呈负相关（ρ = -0.572,P ＜ 0.01）。 结论 乳房外Paget病组织中NHERF1和β联蛋白表达异常,并可能与原发性乳房外Paget病的发生发展及侵袭有关。 【关键词】 佩吉特病,乳腺外; β连环素; 钠氢交换子调节因子1     

白癜风合并鳞状细胞癌一例

临床资料患者,女,52岁。双手背、前臂白斑20余年,斑块、溃疡半年。20余年前于双手背、前臂出现对称性白斑,大小不等,边界清楚,无脱屑、萎缩,无自觉症状,当地诊断为白癜风,长期外用氮芥治疗,白斑处瘙痒,患者反复搔抓,皮损反复溃疡、愈合,逐渐出现肥厚、增生,半年前,原白斑基础上出现肥厚性疣状斑块、溃疡,不易愈合。既往体健,家族中无类似皮肤病患者。     

Cbl-b基因沉默对小鼠原代淋巴细胞免疫活性影响的研究

目的 体外初步研究Cbl-b基因经特异性siRNA沉默后对小鼠淋巴细胞免疫活性的影响。 方法 摘取C57BL/6小鼠的脾脏,体外无菌分离小鼠脾脏淋巴细胞后进行培养。通过EntransterTM-R4000试剂将Cbl-b siRNA转染入小鼠原代淋巴细胞以沉默细胞内Cbl-b的表达。转染72 h后通过酶联免疫吸附实验（ELISA）检测淋巴细胞培养上清中干扰素γ（INF-γ）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达量。通过与B16F10黑素瘤细胞共培养,研究Cbl-b基因沉默后的淋巴细胞对B16F10黑素瘤细胞免疫杀伤活性的影响。 结果 Cbl-b siRNA成功转染进小鼠原代淋巴细胞并能有效沉默细胞内Cbl-b的表达。与阴性对照转染组及空白组相比,转染Cbl-b siRNA的淋巴细胞IFN-γ、TNF-α分泌量增加（P < 0.05）。共培养检测结果显示,Cbl-b siRNA转染组比转染阴性对照组能更高效地杀伤小鼠B16F10细胞。 结论 Cbl-b基因沉默能够促进小鼠淋巴细胞INF-γ、TNF-α分泌能力,并能增强淋巴细胞对B16F10黑素瘤细胞的体外免疫杀伤作用。