SiRNA-Survivin增强鼻咽癌细胞对放射敏感性的实验研究

目的 研究Survivin表达抑制对鼻咽癌放射敏感性的影响,探讨Survivin基因为靶的分子干预在鼻咽癌放疗中作用.方法 采用脂质体将Survivin特异性siRNA转染鼻咽癌5-8F细胞系,半定量RT-PCK、流式细胞仪检测Survivin基因表达;Survivin特异性siKNA转染5-8F细胞,培养24 h后,用6 GY的放射线处理细胞,继续培养24h后,收集细胞.流式细胞仪、镜下计数检测细胞增殖、凋亡与细胞周期.结果 Survivin特异性的siRNA能有效地阻断5-8F细胞系中Survivin基因表达.特异性SiRNA加放射组,细胞抑制率 (33.7±1.5%) 显著高于特异性SiRNA组[ (23.8±4.3) %,(P<0.05) ]和随机序列的siRNA加放射组[ (15.5±1.7) %,(P<0.01) ].特异性SiPNA加放射组,细胞凋亡率 (24.67±0.50) 显著高于特异性SiRNA组[ (20.30±0.44) ,(P<0.05) 1和随机序列的siRNA加放射组[ (6.58±0.38) ,(P<0.01) ].特异性siRNA加放射组,S/G_1比率 (2.76±0.186) 显著高于特异性siRNA组[ (1.91±0.067) ,(P<0.01) ]与随机序列的siRNA加放射组[ (0.585±0.066) ,(P<0.01) ].结论 有效干预Survivin基因表达能提高鼻咽癌细胞的放射敏感性,增强鼻咽癌的放疗效果.     

鞣花酸抗肝癌作用的相关分子

目的 探索五倍子提取物鞣花酸抗肝癌生物学活性的相关分子.方法 鞣花酸体外孵育肝癌HepG-2细胞,采用细胞形态学、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和Hoechst33258染色分析细胞的增殖与凋亡;Westera-blotting分析基因表达.结果 鞣花酸剂量依赖性抑制HepG-2细胞增殖,诱导其凋亡;鞣花酸抑制肿瘤相关基因CtBP、Stathmin和COX-2的表达,随鞣花酸浓度升高,抑制作用增强.结论 鞣花酸通过抑制CtBP、Stathmin和COX-2的表达发挥抗肝癌的生物学作用.     

原发性肝癌Twist基因表达的研究

目的：研究Twist基因在人原发性肝癌（primary liver cancer,PLC）组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SABC染色方法检测45例PLC组织及癌旁组织中Twist蛋白并采用RT-PCR对TwistmR-NA的表达进行分析研究。结果：PLC组织、癌旁组织及正常肝组织中Twist的阳性表达率分别为80.0%、57.8%和22.2%。PLC和癌旁组织与正常对照肝组织中Twist的表达相比较差异均有统计学意义,P〈0.05。肿瘤包膜也可见Twist表达。RT-PCR检测Twist结果显示,PLC组织中Twist mRNA表达显著上调。结论：PLC组织中高表达转录因子Twist对肿瘤的发生、发展起着重要作用。     

EGCG对鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤放疗的增敏作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的增敏作用及可能机制。方法将低分化鼻咽癌CNE-2细胞株接种于20只4～6周龄雄性BALA/C裸鼠皮下,肿瘤长至4～6mm时随机分为对照组、EGCG组、放疗组、EGCG＋放疗组。分别采用生理盐水、EGCG、放疗、EGCG＋放疗等干预。21天取出肿瘤,计算肿瘤抑制率;HE染色观察肿瘤细胞形态变化;RT-PCR检测瘤组织Caspase-3mRNA表达。结果与对照组相比,其他三组肿瘤抑制率均明显升高,EGCG＋放疗组显著高于EGCG组及放疗组（P〈0.05）;对照组肿瘤细胞生长旺盛,EGCG组、放疗组、EGCG＋放疗组可见大量凋亡及坏死细胞,其中以EGCG联合放疗组最明显。Caspase-3mRNA表达均明显升高,而以EGCG＋放疗组最为明显（P〈0.05）。结论 EGCG能增强鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤对放疗的敏感性,其机制可能与上调Caspase-3mRNA的表达有关。     

缺陷型TGF_1βⅡ型受体真核表达质粒载体的构建

目的:本实验旨在通过构建大鼠缺陷型TGF1βⅡ型受体的真核表达质粒载体,为研究大鼠肝组织因TGF1βⅡ型受体缺陷而阻断TGF1β的作用后,对人工免疫性大鼠的肝组织及其他组织的影响提供实验材料。方法:根据大鼠肝组织TGF1βⅡ型受体的基因序列,设计在特异的位置添加终止密码,在此序列两端加入特异的限制性内切酶的酶切位点,从而构建大鼠的缺陷型TGFβ1Ⅱ型受体基因序列,再利用基因重组技术,将其连接在真核表达质粒载体中,对此质粒载体进行酶切电泳鉴定和DNA测序加以验证。结果:运用分子生物学技术,成功获取突变体TGF1βⅡ型受体真核表达质粒载体,经过DNA测序鉴定,确认为实验预期所需。结论:TGF1βⅡ型受体真核表达质粒载体构建成功,其关键涉及基因片段及载体的选择。     

螺旋弹簧和橡皮链拉尖牙向远中的临床效果研究

目的研究Ni-Ti螺旋弹簧和橡皮链施力后,尖牙远中移动速率、龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,探讨不同持续张力的正畸效果和生物学效应。方法用OPAK直丝弓矫治技术托槽,排齐整平后,采用0.018×0.025″SS的Ni-Ti方丝进行尖牙远中移动。然后,用初始力150g的Ni-Ti螺旋弹簧和橡皮链牵引尖牙向远中,21d后,采用游标卡尺测定牙齿移动距离,Beckman全自动生化分析仪检测龈沟液中碱性磷酸酶(GCF-ALP)的活性。结果螺旋弹簧和橡皮链施力21d后,尖牙向远中移动距离差异有显著性(P<0.05)。在螺旋弹簧和橡皮链持续牵引力作用下,GCF-ALP活性随时间推移逐渐增加,6个月时达到最高水平,与加力前比较,差异有显著性(P<0.05);6个月后,GCF-ALP开始下降,12个月时,橡皮链加力侧GCF-ALP活性基本恢复到加力前的水平。但在6和12个月时,GCF-ALP活性在螺旋弹簧施力侧显著高于橡皮链施力侧,差异有显著性(P<0.01)。结论螺旋弹簧拉尖牙向远中移动速率较快,产生的生物学效应较强而持久。     

短发夹RNA对肝癌细胞细胞间粘附分子-1基因表达的影响

目的利用小片段干扰RNA（siRNA）在肝癌细胞内诱导RNA干扰（RNAi），抑制细胞间粘附分子-1（ICAM-1）基因表达，在体外进行RNAi对肝癌治疗的实验研究。方法根据ICAM-1基因设计shRNA片断，构建pGenesil-1／ICAM-1表达载体，转入E．coli菌，并用Lipofectamine tm2000转染HepG2细胞，通过MTT方法检测细胞活性状态，应用免疫组织化学的方法检测肝癌细胞中ICAM-1基因蛋白质表达抑制情况。结果本实验已成功构建了针对ICAM-1基因的pGenesil-1／ICAM-1质粒，免疫组织化学结果显示：RNA干扰（RNAi）能特异而有效地抑制HepG2细胞中ICAM-1基因的表达。结论构建的pchlesd-1／ICAM-1重组质粒能有效抑制ICAM-1基因在肝癌细胞株HepG2中的表达和瘤细胞增殖。     

d-δ-三烯生育酚对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的探讨d-δ-三烯生育酚抗鼻咽癌的生物学活性。方法将低分化5-8F鼻咽癌细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别予40、50、60panol／Ld-δ-三烯生育酚干预48h,对照组不予干预。采用MTT实验、流式细胞仪检测细胞增殖抑制率、凋亡率及细胞周期;荧光染色和显微镜观察细胞形态学变化。结果观察组干预48h后,随浓度增加,镜下观察活细胞减少,漂浮的死亡细胞增多,细胞核强荧光染色细胞比例增多,细胞出现明显的抑制和凋亡现象。观察组不同浓度细胞抑制率及凋亡率明显升高,且明显高于对照组（P均〈0．01）;对照组S期的细胞百分率明显低于观察组,P均〈0．01。结论d-δ-三烯生育酚能抑制5--8F细胞增殖,诱导其凋亡,具有潜在的抗鼻咽癌生物学活性。     

五倍子提取物抗鼻咽癌5-8F细胞的作用及机制

目的:探讨五倍子提取物鞣花酸抗鼻咽癌细胞的生物学活性及其分子机制。方法:体外培养鼻咽癌5-8F细胞,用2,4,6μg/mL鞣花酸处理48 h后,采用M实验分析细胞的增殖;Hoechst33258染色分析细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期;Western印迹检测蛋白表达。结果:鞣花酸对5-8F细胞增殖有抑制作用,2,4,6μg/mL抑制率分别为(29.35±4.95)%,(53.32±4.44)%和(61.75±6.93)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);2,4,6μg/mL鞣花酸处理组S期细胞百分率分别为(25.47±0.74)%,(28.08±1.41)%和(35.49±0.66)%,与对照组(21.26±0.70)%比较,差异有统计学意义(P<0.01);随药物浓度增加,核固缩浓染的凋亡细胞明显增多,COX-2和stathmin蛋白表达下调。结论:五倍子提取物鞣花酸有抗鼻咽癌细胞的作用,其机制可能与COX-2和stathmin下调相关。