乙醛脱氢酶2和线粒体渗透转换参与乙醇后处理的心肌保护作用

目的:探讨乙醇后处理心肌保护作用是否与促进线粒体乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)的生成和抑制线粒体渗透性转换孔道的开放有关.方法:采用离体大鼠心脏Langendorff灌流方法,局部结扎冠状动脉左前降支30 min,复灌120 min复制心肌缺血/复灌模型.测定心室动力学指标和复灌期间冠脉流出液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量.TTC染色法测定心肌梗死面积.RT-PCR测定左心室前壁心尖组织线粒体ALDH2 mRNA的表达.结果:与单纯缺血/复灌相比,乙醇后处理明显促进了左室发展压、左心室内压最大上升和下降速率的恢复,降低复灌期冠脉流出液中LDH的释放和心肌梗死面积,ALDH2 mRNA表达增高.线粒体渗透性转换孔道开放剂苍术苷减弱了乙醇后处理的作用,抑制了心室动力学指标的恢复,LDH释放增多,梗死面积增加,同时ALDH2 mRNA表达降低.结论:乙醇后处理心肌保护作用可能与促进线粒体乙醛脱氢酶2的生成和抑制线粒体渗透性转换孔道的开放有关.     

线粒体融合素2在糖尿病大鼠心肌损伤中的变化

目的:探讨线粒体融合素2(mitofusin 2,Mfn2)在糖尿病大鼠心肌损伤中的变化。方法:腹腔注射55mg/kg链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,分为正常组、糖尿病4周组和糖尿病8周组。测定血流动力学指标、大鼠心系数;自动生化分析仪测定血浆肌酸激酶同工酶(creatine kinaseisozyme,CK-MB)水平。RT-PCR检测左室心尖部组织Mfn2的表达。结果:与正常大鼠相比,糖尿病4周、8周大鼠左室发展压、左室最大上升和下降速率、心率、左室做功均明显下降(P<0.05,P<0.01),心室舒张末压上升(P<0.01),心系数(HW/BW)明显增加(P<0.01),血浆CK-MB水平升高(P<0.05,P<0.01),Mfn2mRNA的表达降低(P<0.01);与糖尿病4周相比,糖尿病8周大鼠左室发展压、左室最大上升速率和下降速率、心率及左室做功进一步下降(P<0.05,P<0.01),心室舒张末压升高(P<0.01),HW/BW、CK-MB水平持续性升高(P<0.01),Mfn2mRNA的表达进一步降低(P<0.01)。结论:随着糖尿病病程的延长,糖尿病大鼠心室功能进一步下降,其机制可能与Mfn2的表达降低有关。     

内吗啡肽在小鼠树突状细胞的诱导表达

目的研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2在小鼠树突状细胞的表达。方法从7～8周龄的C57BL/6J小鼠骨髓提取骨髓前体细胞培养,经CD11c(树突状细胞的特异性标记)免疫磁珠分选,获得纯化的树突状细胞。流式细胞仪分析表明,CD11c阳性细胞纯度达95%以上。免疫荧光染色研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2在树突状细胞的表达;酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA)的方法,检测培养树突状细胞上清液中的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2的含量。结果免疫荧光染色表明,活化的树突状细胞内可分泌内吗啡肽-1和内吗啡肽-2;酶免疫测定检测结果表明,不同的Toll样受体(toll like receptor,TLR)配体活化树突状细胞促使分泌不同浓度的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2。结论活化的树突状细胞可诱导内吗啡肽的表达。     

糖尿病大鼠膈肌功能损伤及钙调控蛋白基因表达的改变

目的研究糖尿病大鼠膈肌功能及钙调控蛋白基因表达的变化,探讨糖尿病大鼠膈肌功能损伤的发生机制。方法使用链
脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,SD大鼠随机分为糖尿病组（随机血糖≥16.7 mmol/L）和正常对照组,造模后4周、8周测定大鼠
体质量和膈肌/体质量比值,生化指标检测各组大鼠空腹血糖和膈肌组织线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）活性;应用体外灌流大鼠
膈肌条的方法,测定单收缩张力、最大强直张力、峰值收缩时间、半舒张时间、张力-频率曲线,电镜观察大鼠膈肌超微结构,采用
RT-PCR检测大鼠膈肌肌质网钙泵（SERCA）和受磷蛋白（PLB）mRNA表达。结果（1）与正常对照组相比,糖尿病大鼠体质量和
膈肌质量/体质量比值均明显降低（P<0.01）,膈肌组织SDH的活性显著降低（P<0.01）;（2）在给予大鼠膈肌条10、20、40、60、
100 Hz刺激时,糖尿病大鼠膈肌在各频率下的收缩张力明显低于正常对照组（P<0.01）;膈肌力学指标单收缩张力和最大强直张
力明显降低,峰值收缩时间和半舒张时间明显延长（P<0.01）;（3）超微结构显示糖尿病组大鼠膈肌组织损伤明显,肌纤维断裂,
肌质网扩张,线粒体水肿,数目减少,脊断裂,空泡化或囊泡化,同时可见随病程延长膈肌损伤明显加重;（4）RT-PCR结果提示：
与正常对照组相比,糖尿病组大鼠膈肌SERCA mRNA表达均明显降低（P<0.01）,糖尿病大鼠膈肌SERCA mRNA表达8周组比
4周组明显降低（P<0.01）,糖尿病大鼠膈肌PLB mRNA表达显著增强（P<0.01）。结论糖尿病大鼠膈肌超微结构受到破坏,线
粒体损伤和数目减少,线粒体SDH活性降低,ATP生成减少,膈肌组织SERCA mRNA表达减少和PLB mRNA表达增强,引起
膈肌肌质网摄取Ca2+减少,促成膈肌收缩和舒张功能损伤。
     

乙醛脱氢酶2在糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的抗凋亡作用

摘要：目的观察乙醛脱氢酶2（ALDH2）在糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注凋亡发生中的作用。方法大鼠分为正常组、糖尿病组和
ALDH2激动剂乙醇+糖尿病组。4周后行离体心肌缺血/再灌注（I/R）。测定复灌期间冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。检
测心肌组织细胞ALDH2、caspase-3的活性;RT-PCR测定左心室前壁心尖组织Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果与正常大鼠I/R
相比,糖尿病大鼠复灌期冠脉流出液中LDH释放增加,心肌组织caspase-3活性增加,ALDH2活性降低,Bcl-2/Bax mRNA比值
降低;与糖尿病大鼠心肌I/R相比,ALDH2激动剂乙醇使得心肌复灌期间冠脉流出液中LDH释放减少,心肌caspase-3活性降
低,ALDH2活性增高,Bcl-2/Bax mRNA比值增高。结论增强ALDH2在糖尿病大鼠心肌中的表达对缺血/再灌注损伤有明显
的保护作用;其机制可能与抑制细胞凋亡的发生有关。
     

留学生生理学实验教学体会

目的:提高留学生生理学实验的教学质量。方法:分析留学生生理学实验课的教学准备、实验课实施、有待解决的问题等几个方面。结果:留学生生理学实验教学得到学生的肯定和好评。结论:根据留学生特点,充分做好课前准备,多种方式结合进行实验教学有利于提高教学质量。     

激动ALDH2抑制程序性坏死减轻脓毒症小鼠心肌损伤的作用探讨

目的 观察脓毒症小鼠心肌损伤中程序性坏死的发生,探讨线粒体乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)是否通过抑制程序性坏死发挥心肌保护作用。方法 选取8周龄雄性C57BL/6J小鼠,采用CLP法诱导脓毒症心肌损伤模型。将小鼠随机分为3组(10只/组):假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+Alda-1组(CLP+Alda-1组)。CLP术后24 h, HE染色观察心肌损伤,透射电镜观察心肌超微结构变化;用ELISA法测定心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western Blot法检测心肌组织ALDH2、Caspase-8、RIPK1、RIPK3蛋白表达。结果 与Sham组相比,CLP组小鼠HE染色显示心肌纤维排列不整齐,有炎症细胞浸润,间质水肿,红细胞渗出;透射电镜观察到心肌线粒体肿胀,嵴减少,外膜破裂;心肌组织TNF-α含量升高(P<0.01),Caspase-8蛋白表达降低(P<0.05),RIPK1和RIPK3蛋白表达升高(P<0.01)。与CLP组相比,CLP+Alda-1组小鼠心肌形态有改善,线粒体...     

激动线粒体乙醛脱氢酶2对高糖诱导的大鼠心肌细胞MMP-14及TIMP-4的影响北大核心CSCD

目的探讨基质金属蛋白酶14(MMP-14)、基质金属蛋白酶组织抑制因子4(TIMP-4)是否参与线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)抗高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤。方法不同浓度葡萄糖干预原代大鼠心肌细胞,MTT法检测不同时间点细胞活力,确定高糖诱导的心肌细胞损伤模型。实验分为正常对照组(NG,5.5 mmol·L^(-1))、NG+ALDH2激动剂Alda-1组、高糖组(HG,30 mmol·L^(-1)),HG+Alda-1组。MTT法和DHE染色分别检测细胞活力及氧化应激水平,Western blot检测ALDH2、MMP-14、TIMP-4蛋白表达。结果根据细胞活力检测确定30 mmol·L^(-1)葡萄糖干预48 h为损伤模型。与NG组比较,HG组细胞活力、ALDH2、MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值均降低,氧化应激、TIMP-4蛋白水平升高;与HG组比较,Alda-1干预后细胞活力、ALDH2及MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值升高,氧化应激及TIMP-4蛋白表达降低。结论激动ALDH2可改善高糖引起的心肌细胞损伤,可能与抑制氧化应激、促进MMP-14蛋白表达、抑制TIMP-4蛋白表达有关。     

心肌肥大相关蛋白YAP在大鼠糖尿病心肌病中的表达

目的:观察Hippo信号通路效应蛋白YAP在糖尿病大鼠心肌肥大中的改变,分析可能的作用机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为2组,每组6只。正常对照组:大鼠正常饮水饮食喂养12周;糖尿病心肌病组:大鼠腹腔注射STZ（55 mg/kg）复制糖尿病模型,以血糖≥ 16.7 mmo1/L,持续1周确定造模成功,继续饲养12周。测定大鼠空腹血糖水平和体质量;心室内插管检测左心室动力学变化,称量心脏质量计算心体比;荧光定量PCR检测心肌肥大相关基因心房钠尿肽和脑利钠肽mRNA表达,Western blot法检测YAP和p-YAP蛋白表达改变。结果:与正常对照组相比,糖尿病组大鼠心体比增加,左心室舒张末压增高,左心室发展压、左心室内压最大上升和下降速率及左心室做功均降低;心肌肥大相关基因心房钠尿肽和脑利钠肽mRNA表达增加;YAP蛋白表达增加,p-YAP/YAP比值降低（P<0.05~P<0.01）。结论:糖尿病可诱导心肌肥大,其机制可能与增加Hippo信号通路效应蛋白YAP的表达,降低其磷酸化水平有关。     

线粒体通透性转换孔在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨线粒体通透性转换孔（MPTP）的开放对内吗啡肽-1后处理减轻心肌缺血再灌注损伤的作用。方法将45只雄性SD 大鼠随机分为5组（n=9/组）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、内吗啡肽-1后处理组（EM50组）、线粒体通透性转换孔开放剂苍 术苷后处理组（Atr组）和内吗啡肽-1+苍术苷后处理组（EM50+Atr组）。建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型,通过经颈动脉插管至左 心室实时监测血流动力学,记录各组大鼠的血流动力学指标,再灌结束后采集大鼠血浆,检测乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、 白介素-6、肿瘤坏死因子-α,氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛,细胞色素C等生化指标,大鼠心肌组织HE染色,采用Evans blue 和TTC双染色法检测心肌梗死面积,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的表达。结果与S 组比较,IR组心率和血压降低（P<0.05）;与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌 钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛、细胞色素C含量或活性下降（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加（P< 0.05）;心肌梗死面积减少（P<0.05）;Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达量升高（P<0.05）;与EM50组 比较,EM50+Atr组心率和血压降低（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛、细 胞色素C含量或活性增加（P<0.05）,超氧化物歧化酶活性降低（P<0.05）;心肌梗死面积增加（P<0.05）;Bax和cleaved caspase-3蛋白 表达量升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达量降低（P<0.05）。结论内吗啡肽-1后处理可能通过抑制MPTP的开放,减少线粒体中Cyt-C 的释放,下调凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达,减少心肌细胞凋亡,减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,发挥心肌保护作用。