重组腺病毒rAd-MK-TNFα对人乳腺癌细胞的体外抑制作用

 目的 初步观察重组腺病毒rAd-MK-TNFα对乳腺癌细胞的抑制作用。方法 体外转染系列重组腺病毒，观察rAd-MK-TNFα在乳腺癌细胞Bcap37中TNFα的表达以及其对乳腺癌细胞的生长抑制作用，并比较其与对照病毒对乳腺癌细胞及人成纤维细胞生长的抑制作用的不同。结果 rAd-MK-TNFα感染Bcap37细胞后，可检测到TNFα的表达；rAd-MK-TNFα对Bcap37乳腺癌细胞存在生长抑制作用，且与其病毒浓度呈正相关；rAd-MK-TNFα对人成纤维细胞的抑制作用小于非靶向腺病毒（rAd-CMV-TNFα）。结论rAd-MK-TNFα可能通过靶向表达TNFα对乳腺癌细胞产生抑制细胞生长的作用。     

RNAi相关技术及其在肿瘤基因治疗中的应用

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)介导的、序列特异地引起转录后基因沉默的现象，是生物体内抵御转座子和病毒感染的重要保护机制之一。RNAi相关技术可作为一种简单有效的代替基因敲除的工具应用于功能基因组学和疾病的基因治疗研究。现综述RNAi机制、研究现状及RNAi相关技术在肿瘤基因治疗研究中的应用进展。     

两个大肠癌负相关新基因的研究

目的：在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素。研究两个大肠癌负相关基因的结构与功能。方法：采用强化荧光原位杂交（FSIH）,进行两个新大肠癌基因染色体定位。通过Dot blot,Northern blot,RT-PCR-ELISA,免疫组化及体内外转染实验进行新基因功能研究。结果：已完成两个新基因的全长cDNA序列及染色体定位等结构研究并进行了两基因的核心酸与表达研究及功能研究。SNC6基因全长3168bp,定位于染色体22q13区带,共12个外显子及11个内含子,SNC19全长3152bp,这位于染色体11q24区带,两个基因于1998年被国际命名委员会分别命名为ST13、ST14基因,并被列入人类基因组图谱中,对比两个新基因在正常大肠粘膜及癌组织核酸水平表达情况,癌组织低于正常粘膜,在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一。两基因均懂得获得了表达蛋白。SNC6已制备了单抗,经免疫组化检测表达与核酸表达结果相似,经体内外研究SNC6基因有抑制大肠癌细胞系生长的作用,SNC19已明确为丝氨酸蛋白酶家族成员,结论SNC6与SNC19基因可作为新的大肠癌相关基因加以研究、利用。目前仍需继续深入研究该两基因的功能。     

利用TaqMan技术定量检测基因表达的引物探针设计

目的建立优化的实时荧光定量PCR的引物探针设计参数。方法设计引物和探针时的原则包括：①上、下游引物的融解温度（Tm值）应尽量相同或相差越小越好,以利于PCR退火温度的优化;②扩增区域应当跨越不同的外显子（在基因组DNA上至少一个以上的内含子）,以利于区分基因组DNA扩增产物和cDNA扩增产物;③引物和探针的位置最好位于外显子和内含子交界处,以避免引物和探针与基因组DNA的结合;④扩增区域最好靠近基因的3’端,以减少不完全逆转录的影响。本次研究设计了实时荧光定量RT—PCR检测人甲胎蛋白mRNA的引物和探针,并提取临床肝癌组织标本中的RNA,检测其中甲胎蛋白的表达。绪果本次研究设计的实时荧光定量RT—PCR检测甲胎蛋白mRNA的引物和探针具有良好的特异性,可用于临床标本的检测。结论本次研究确定的原则对提高利用TaqMan技术定量检测目的基因结果的可靠性具有很好的指导意义。     

RNAi相关技术及其在肿瘤基因治疗中的应用

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)介导的、序列特异地引起转录后基因沉默的现象,是生物体内抵御转座子和病毒感染的重要保护机制之一.RNAi相关技术可作为一种简单有效的代替基因敲除的工具应用于功能基因组学和疾病的基因治疗研究.现综述RNAi机制、研究现状及RNAi相关技术在肿瘤基因治疗研究中的应用进展.     

两个大肠癌负相关新基因的研究

目的在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素,研究两个大肠癌负相关基因的结构与功能。结果已完成两个新基因的全长cDNA序列分析及染色体定位等结构研究,并进行了两基因的核酸与蛋白表达研究及功能研究。SNC6基因全长3168pb,定位于染色体22q13区带,共有12个外显子及11个内含子。SNC19全长3152bp,定位于染色体11q24区带。两个基因于1998年被国际命名委员会分别命名为ST13、ST14基因,并被列入人类基因组图谱中。对比二个新基因在正常大肠粘膜及癌组织核酸水平表达情况,癌组织低于正常粘膜,在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一。两基因均已获得了表达蛋白。ST13已制备了单抗,经免疫组化检测表达与核酸表达结果相似,经体内外研究ST13基因有抑制大肠癌细胞系生长的作用。ST14已明确为丝氨酸蛋白酶家族成员。结论 SNC6与SNC19基因可作为新的大肠癌相关基因加以研究,利用。目前仍需继续深入研究该两基因的功能。