淫羊藿甙促进成骨细胞增殖与分化的作用及其机制

 目的 探讨淫羊藿甙对骨形态发生蛋白细胞信号通路Smad1、Smad5和Smad4表达的调节作用及促进成骨细胞增殖与分化的机制。方法 在体外分别用含淫羊藿甙0、10^-9、10^-8 和10^-7 mol/L的条件培养液干预MC3T3-E1细胞。给药后第1天、2天和3天,分别应用四甲基噻唑蓝法绘制细胞生长曲线并计算细胞群体倍增时间,用速率分光光度法测定碱性磷酸酶含量,用RT-PCR和Western blot技术检测Smad1、Smad5、Smad4及骨钙素、Runx2、骨形态发生蛋白-2、骨保护素mRNA的表达,于细胞生长的第21天观察钙结节数量。结果 淫羊藿甙含量为10-8 mol/L时,MC3T3-E1细胞增殖能力最强,碱性磷酸酶活性和钙结节数量明显增加;淫羊藿甙作用细胞第1天、2天和3天时,10-8 mol/L组细胞Smad1、Smad5和Smad4 mRNA的表达量始终保持较高水平,第3天时10^-9 mol/L和10^-7 mol/L组表达明显减少;第2天时,10^-8 mol/L组细胞Runx2、骨形态发生蛋白-2、骨保护素mRNA和骨钙素、Smad1、Smad5和Smad4蛋白表达明显增加。结论 淫羊藿甙通过直接刺激 MC3T3-E1细胞的骨形态发生蛋白-2、Runx2、Smad1、Smad5和Smad4的表达,且以表达水平同步增高的方式促进其成骨性分化。     

雄性大鼠肾上腺大部切除后骨质疏松生物力学研究

目的 研究雄性大鼠骨质疏松的骨生物力学特性.方法 基于切除肾上腺雄性大鼠骨质疏松模型,研究其股骨生物力学指标.结果 骨质疏松大鼠弯曲弹性模量、弯曲刚性系数及最大弯曲应力降低,弯曲韧性系数雄性大鼠升高.结论 骨质疏松雄性大鼠骨质综合生物力学水平降低,骨质抗应力性能降低,骨质韧性损失慢于或小于抗应力性能.     

贲门癌围手术期十二指肠胃食管反流的研究

目的探讨围手术期贲门癌与十二指肠胃食管反流的关系及作用。方法对22例贲门癌患者进行了围手术期胃食管24 h监测pH值和十二指肠胃反流积分的测定。结果贲门癌患者手术前后各项监测指标均高于正常,十二指肠胃反流积分亦增高,术后监测指标明显高于术前。结论贲门癌患者手术前后存在病理性十二指肠胃食管反流,其反流液不是单纯的酸性胃液,还含有十二指肠胃反流的碱性液体,对胃食管粘膜有更强的破坏力。     

BMPs与wnt-3a促进C3T3-E1细胞成骨作用的研究

【目的】 在促进MSCs骨形成的众多调节因子中,骨形成蛋白(BMPs)家族在胚胎发育及骨骼形成中扮演重要的角色。目前发现的BMPs家族成员骨诱导活性中,具有成骨活性的有 BMP2、7、9 亚型。除了BMP通路外,wnt通路在骨形成中也起到了重要的作用。本实验旨在进行BMP-2/wnt-3a、BMP-7/wnt-3a、BMP-9/wnt-3a三种联合转染,观察感染后细胞各基因和蛋白的干扰效率及细胞体外成骨分化的影响,评价三种转染的成骨分化能力的强弱,并与单独转染效果进行比较。 【方法】 以cDNA文库为模版,应用PCR方法获得BMP2、BMP7、BMP9、wnt-3a基因的编码序列,经大肠杆菌转化后抽取质粒,构建基因表达质粒载体,酶切鉴定重组体并且经测序进一步确定。然后用pLP/VSVG、pLP2、pLP1质粒与BMP2、BMP7、BMP9、wnt-3a共转染293FT细胞。包装pELNS-BMP2、BMP7、BMP9、wnt-3a后转染小鼠间充质干细胞MC3T3-E1细胞,GFP荧光证实转染效果。茜素红染色检测钙结节,蛋白质印迹和real-time PCR检测成骨相关基因(Runx2)的表达水平,鉴定各成骨诱导因子的单独转染效能。最后用双基因联合转染(BMP-2/wnt-3a,BMP-7/wnt-3a,BMP-9/wnt-3a三组)MC3T3-E1细胞,GFP荧光证实转染效果;应用ELISA检测MC3T3-E1细胞培养上清中BGP和ALP的表达水平;应用real-time PCR检测Runx2 mRNA的表达水平;应用蛋白质印迹法检测蛋白的表达水平,鉴定双基因联合转染的成骨分化效能。 【结果】 pELNS-BMP2、pELNS-BMP7、pELNS-BMP9、pELNS-wnt3a表达质粒构建成功。重组慢病毒pELNS-BMP2、pELNS-BMP7、pELNS-BMP9、pELNS-wnt3a构建成功,成功转染MC3T3-E1细胞;Runx2表达水平:BMP2>BMP9>BMP7;茜素红染色显示BMP-2钙结节数量最多。双基因联合转染MC3T3-E1细胞,GFP荧光证实转染成功;蛋白质印迹与real-time PCR法显示三组联合转染Runx2表达水平比单独转染明显上升,且联合转染Runx2表达水平:BMP-2/wnt-3a>BMP-9/wnt-3a>BMP-7/wnt-3a; BGP表达与 ALP表达亦然。 【结论】 BMPs能促进间充质干细胞向成骨细胞分化, 其中BMP2成骨效果最好。而BMPs与wnt-3a的联合转染成骨效果高于单独转染,说明BMP通路与wnt通路有协同作用。其中BMP-2/wnt-3a双基因联合转染比另两种转染(BMP-7/wnt-3a和BMP-9/wnt-3a)成骨效能更高。这为组织工程骨重建研究提供了重要的理论依据和技术支持。     

肺癌患者治疗前后血清CEA、NSE和Ft的研究

目的 了解血清ＣＥＡ、ＮＳＥ及Ｆｔ变化对诊断肺癌的临床价值。方法 应用ＥＬＩＳＡ方法对１０７例肺癌患者进行血清ＣＥＡ、ＮＳＥ及Ｆｔ联合检测。结果 ＳＣＬＣ组化疗后血清ＮＳＥ水平低于疗前（Ｐ〈０．０１）。ＮＳＣＬＣ组化疗后ＮＳＥ和Ｆｔ水平均降低（Ｐ〈０．０１）。ＮＳＣＬＣ组肺癌切除术后血清ＣＥＡ和ＮＳＥ水平降低（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１），且接近正常值。结论 ＮＳＥ是评估ＳＣＬＣ的特异性标志物，Ｃ     

CD40 shRNA质粒表达载体的构建

目的体外合成小鼠CD40序列特异性shRNA，并构建连接于质粒表达载体，并进行序列分析，为开辟诱导免疫耐受的新途径提供实验依据。方法设计有小发夹结构的两条DNA序列。经退火成互补双链，再连接至pGenesil-1质粒载体，转化DH5a菌株，提取质粒行酶切鉴定后，进行测序分析。结果成功构建了CD40 shRNA质粒表达载体。结论CD40 shRNA质粒表达载体的成功构建为研究RNA干扰CD40基因表达，诱导免疫耐受奠定了基础。     

机体叶黄素水平与人体视功能和老年黄斑变性罹患的相关关系研究

【目的】 老年黄斑变性(age-related macular degeneration, AMD)是视网膜黄斑区的退行性病变,是我国中老年人最常见的致盲眼病之一。作为眼底黄斑区重要组成色素之一,叶黄素可能具有预防AMD的功效。本实验拟在前期研究基础上,比较AMD患者及对照人群膳食摄入叶黄素和机体叶黄素水平及视功能的差异,分析叶黄素对视功能的影响,探讨机体叶黄素的水平与AMD罹患之间的关系。 【方法】 依照修订后的 Age-Related Eye Disease Study(AREDS)诊断标准,采用眼底彩色照像对 AMD 进行诊断和分级后,募集符合项目要求的 AMD 患者 68 例及非AMD 对照 68 例。调查受试对象一般个人情况(姓名、性别、年龄、职业、文化程度、用眼卫生、眼部症状、疾病史及家族史)和营养状况;采用食物频率调查表记录分析其膳食营养摄入情况。采用 ETDRS 视力表测量最佳矫正视力;采用共焦激光眼底扫描系统计算分析视网膜黄斑色素密度(macular pigment optical density,MPOD)值;采用对比敏感度检查仪测量对比敏感度;采用光学相干断层扫描技术(optical coherence tomography,OCT)对研究对象的眼底形态进行检查;通过视功能相关的生存质量量表-25(VFQ-25)调查研究对象的一般健康及视力情况、活动时困难程度及其他一些视力问题。采用SPSS软件进行数据分析。 【结果】 膳食叶黄素及维生素、锌、其它类胡萝卜素摄入量与 AMD 的罹患风险均未见显著性关联。与低 MPOD 水平的人群相比,高 MPOD 水平的人群罹患 AMD 风险 OR (95%CI)为 0.29(0.13~0.55);且罹患 AMD 的风险随 MPOD 水平的增加显著降低(P<0.01)。AMD 患者低中频对比敏感度显著下降,AMD 患者最佳矫正视力和主观视功能较非 AMD 对照组有下降趋势。MPOD 水平与机体视功能密切相关;随 MPOD 水平提高,最佳矫正视力和对比敏感度均呈上升趋势。 【结论】 通过进行该项病例对照研究,我们发现膳食叶黄素摄入量与早期 AMD 患病未见显著性关联,高 MPOD 水平可显著降低 AMD 罹患风险。膳食叶黄素摄入量与 MPOD 水平密切相关,但随疾病程度加重血清叶黄素浓度与 MPOD 水平相关程度有下降趋势。     

骨质疏松、黄韧带骨化与正常人的血清miRNA的对比研究

【目的】 50岁以上的妇女的骨质疏松发病率高达70%,黄韧带骨化主要累及老年人,65岁以上亚洲人的发病率达40%。两者均好发于老年人,然而黄韧带骨化患者均无骨质疏松现象。本研究目的利用miRNA微阵列芯片检测骨质疏松、黄韧带骨化患者以及正常人的血清差异miRNA。为研究黄韧带骨化、骨质疏松等老年骨骼系统疾病的发生机制、早期诊断及治疗提供有益的线索。 【方法】 收集5例骨质疏松、5例黄韧带骨化患者以及5例正常人群的血清。提取血清总RNA,经质控合格后,利用miRNA微阵列芯片技术筛选骨质疏松、黄韧带骨化患者与正常对照的血清标本中的差异表达的miRNA。 【结果】 以fold-changge>2、P>0.05为标准,与正常对照人群血清miRNA比较,黄韧带骨化患者血清中有17个miRNA表达明显上调,3个miRNA明显下调,骨质疏松患者血清中有11个miRNA表达明显上调。miRNA21、24为黄韧带骨化与骨质疏松患者血清的共同差异miRNA。 【结论】 本研究初步筛选出黄韧带骨化、骨质疏松与正常人群相比的差异表达的miRNA,为miRNA对黄韧带骨化和骨质疏松的筛查、早期诊断提供有益线索。并且发现两组疾病血清中存在的共同差异miRNA:miRNA24、miRNA21。两者在黄韧带骨化表现为下调,在骨质疏松表现为上调。提示miRNA21、24可能在黄韧带骨化和骨质疏松的发生、发展过程中起重要作用,为黄韧带骨化和骨质疏松等老年骨骼系统疾病的治疗提供新的思路。     

对影响提高医学生综合能力因素的研究

为了研究影响医学生综合能力培养因素,对医科大学三年级学生200人及相关教师12人展开了调查,利用解释结构模型对医科大学生综合能力培养影响因素之间的关系进行分析,提出了针对性的解决措施,并基于模糊综合评价法对实施效果进行研究。研究结果显示,从明确学生培养目标、完善学生培养体系上进行教学改革,引入职业教育与专业学习相结合的理念,提高教师的教学质量,激发学生为自身职业发展而有效学习和实践的积极性,达到培养医科院校优秀应用性人才和提高医科学生临床综合技能水平的根本目标。     

50例贲门癌患者血细胞参数临床价值的分析

目的 检测贲门癌患者血细胞参数，评价其临床意义。方法 利用SYSMEX-XE-2100血细胞分析仪监测50例贲门癌患者静脉血，其结果与正常对照组对比分析。结果 贲门癌组WBC、RBC、HGB、HCT、PLT、MPV降低(P＜0．01)；GR、MCV、RDW、MCH增高(P＜0．01)；LY、MCHC在正常范围内(P＞0．05)。结论 贲门癌患者存在恶性贫血倾向及慢性DIC发展过程。因此，监测其外周血细胞变化对了解该贫血及血栓前状态的发生和发展趋势具有一定临床价值。