乌司他丁对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及机制

目的阐明乌司他丁（UTI）对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及具体分子机制。 方法以人脐静脉内皮细胞系EA.hy926为研究对象,建立炎症细胞模型及RhoA过表达细胞模型,分别用UTI和TNF-α处理细胞,采用Transwell法、TEER法检测细胞通透性;Western Blot法及RT-PCR法检测Rho/ROCK信号通路相关关键分子（RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin）的表达变化情况。 结果与正常对照组相比,TNF-α作用后EA.hy926细胞电阻值明显降低,细胞通透性显著升高,差异具有统计学意义[（33.67±4.04）Ω/cm² vs（67.17±3.81）Ω/cm²,t=10.435,P<0.01],细胞内RhoA、ROCK2、p-MYPT1的表达量明显增加,差异具有统计学意义（均P<0.05）,VE-cadherin的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,而UTI可逆转上述变化情况;与UTI处理组相比,RhoA过表达细胞模型中RhoA、ROCK2及p-MYPT1的表达显著增高,VE-cadherin表达降低,细胞通透性增加,差异具有统计学意义（均P<0.05）,而空载病毒组中上述分子的表达水平以及细胞通透性无明显变化,差异无统计学意义（均P>0.05）。 结论UTI能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的血管内皮细胞通透性增加,改善血管内皮屏障功能障碍。     

入院时血清嗜铬粒蛋白A浓度和ICU患者病情严重程度的相关性研究

目的 探讨重症患者入院时血清嗜铬粒蛋白A(Chromogranin A,CGA)浓度与危重病评分以及预后之间的关系.方法 105例连续收入ICU的患者被分为非全身炎症反应(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、SIRS和脓毒症组(包括脓毒症、严重脓毒症和脓毒性休克3个亚组),健康志愿者(n=18)为对照组.比较患者入院时血清CGA、降钙素原(procalcitonin,PCT)、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)和序贯器官衰竭(SOFA)评分.结果 SIRS组、脓毒症各亚组患者入院时血清CGA浓度比健康对照组和非SIRS组明显增高(P＜0.05).CGA浓度与PCT、WBC、血肌酐、APACHEⅡ和SOFA都成正相关(r=0.759、0.570、0.507、0.576、0.718,P＜0.05).ROC分析显示CGA、APACHEⅡ与PCT评分可作为28 d死亡的预测指标(曲线下面积分别为0.818、0.789和0.685).以血清CGA浓度为139 μg/L为截分值,Kaplan-Meier分析提示CGA增高患者死亡率明显高于对照组(P＜0.01).结论 重症患者入院的血清CGA浓度和病情严重程度呈正相关,血清CGA浓度超过139 μg/L的患者死亡率明显增高,CGA是预测ICU患者死亡风险的独立指标.     

CHGA-415T/C和-462G/A基因多态性与重症患者预后的相关性研究

目的：探讨嗜铬粒蛋白A（chromogranin A,CHGA）启动子区域-415T/C和-462G/A位点基因多态性与重症患者预后的相关性。方法：纳入连续入住ICU的294例重症患者,通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）及DNA测序技术检测外周血基因组CHGA-415T/C和-462G/A位点基因型,并与患者临床特征做相关性分析。结果：①本组患者与亚洲地区健康人群CHGA-415T/C和CHGA-462G/A位点的最小等位基因频率（minor allele frequency,MAF）之间无统计学差异;②生存组-415T/C位点MAF高于死亡组,分别为0.378和0.292（P=0.046）,死亡组与生存组-462G/A位点MAF无统计学差异,分别为0.096和0.107（P=0.717）;③Kaplan-Meier分析提示-415T/C位点突变组（包括TC和CC基因型）和野生组（TT基因型）的生存曲线有统计学差异（P=0.007）,突变组比野生组的30 d死亡率明显增高,分别为0.325和0.191（P=0.010）;二元logistic回归分析显示,CHGA-415T/C多态性是重症患者死亡的独立危险因素（OR=2.055,95%CI=1.051~4.019,P=0.035）。结论：重症患者死亡组CHGA-415T/C位点MAF更高,CHGA-415T/C突变组患者有更高的30 d死亡率,CHGA-415T/C位点多态性是重症患者30 d死亡率的独立危险因素。     

微循环监测技术的研究进展

正常的血流灌注是保证人体生理功能的一个必要条件。活体微循环的监测对于了解脏器功能、诊治疾病、研究疾病机制和药物治疗效果有重要的作用。该文就几种活体微循环监测技术,如正交偏振光谱技术、侧流暗视野成像技术、激光多普勒成像技术、近红外线光谱成像技术、脉搏血氧测定监测技术等近年来的主要研究进展予以综述。     

Chromofungin抑制TNF—α诱导血管内皮通透性增加的钙信号机制北大核心CSCD

目的探讨嗜铬粒蛋白A（chromogranin A,CGA）衍生多肽Chromofungin（CHR）对肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导血管内皮细胞钙内流的影响。方法以人脐静脉内皮细胞系EA．hy926细胞为研究对象,建立TNF—α刺激炎症模型,实验分为对照组、TNF—α组、10nmo/LCHR＋TNF—α组、100nmol/LCHR＋TNF-α组和1000nmol/L CHR＋TNF—α组。Transwell小室法检测EA．hy926细胞通透性,激光共聚焦法检测EA．hy926细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]1）的变化。结果与对照组比较,TNF-α组明显增加EA．hy926细胞通透性[（1．189±0．086）vs．（1．771±0．195）,t=4．343,P=0．01];10nmol/L、100nmol/L和1000nmoL／LCHR抑制TNF-α诱导的EA．hy926细胞通透性增加,其中10nmol/L和100nmol/L CHR显著降低TNF-α诱导的EA．hy926细胞高通透性[（1．771±0．195）vs．（1．315±0．134）,t=3．403,P=0．042;（1．771±0．195）vs．（1．236±0．181）,t=3．985,P=0．017],1000nmol/LCHR降低TNF-α诱导的EA．hy926细胞高通透性,差异无统计学意义[（1．771±0．195）vs．（1．411±0．255）,t=2．679,P=0．126]。10nmol/L、100nmol/L和1000nmol/LCHR作用于EA．hy926细胞时细胞内Ca2＋浓度无明显变化。TNF-仪诱导EA．hy926细胞外Ca2＋快速内流,各时间点细胞内Ca2＋荧光强度F140、F1100与起始荧光值F1100比较,差异具有统计学意义[荧光强度分别为：（41．497±3．788）vs．（56．193±3．082）,F=196．129,P=0．000;（41．497±3．788）vs．（53．457±4．536）,F=101．19,P=0．000],10nmol／L、100nmol/L和1000nmol/LCHR能够抑制TNF-仪引起的Ca2＋快速内流。结论CHR抑制TNF-α诱导的EA．hy926细胞通透性增加,这一作用可能是通过阻止TNF-α诱导的细胞外Ca2＋内流来实现的。     

乌司他丁抑制TNF-α诱导血管内皮细胞高通透性的研究

目的 探讨乌司他丁(UTI)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞高通透性的影响.方法 建立人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞TNF-α诱导炎症模型,将其分为正常组、TNF-α组、UTI组及TNF-α+不同浓度的UTI组(T+U组),分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测EA.hy926细胞活性,EVOM法测单层细胞电阻,RT-PCR法、免疫细胞化学法检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达.结果 与正常组相比,TNF-α作用下EA.hy926单层细胞电阻值明显降低(67.200 ±8.937 vs.33.600±8.771,P=0.010),通透性增加,UTI在1～ 100 U/mL范围内以剂量依赖性方式改善TNF-α所致的EA.hy926细胞高通透性(40.133 ±7.484 vs.33.600±8.771,P=0.382;49.232±3.162 vs.33.600±8.771,P=0.044;63.700±8.515 vs.33.600±8.771,P=0.013).TNF-α作用下EA.hy926细胞VE-cadherin mRNA的表达较正常组显著降低(1.089 ±0.018 vs.0.835±0.021,P=0.000),UTI可抑制TNF-α引起的VE-cadherin低表达,其中UTI浓度为10 U/mL和100U/mL时VE-cadherin mRNA的表达较TNF-α组差异具有统计学意义(0.976±0.014 vs.0.835±0.021,P =0.001;1.115 ±0.015 vs.0.835 ±0.021,P=0.000),UTI的上述作用在1～ 100 U/mL浓度范围内呈现出剂量依赖性.免疫细胞化学结果显示,与正常组相比,TNF-α作用下VE-cadherin的表达明显降低(0.061 ±0.013 vs.0.093 ±0.014,P=0.049),而UTI可改善TNF-0导致的VE-cadherin表达降低(0.032 ±0.004vs.0.061 ±0.013,P=0.016).结论 UTI可抑制TNF-α引起的EA.hy926细胞通透性增加,且在一定范围内呈现出剂量依赖性.