基于ELISA的神经胶质酸性蛋白自身抗体的血清含量测定及其在脑胶质母细胞瘤诊断中的应用

 目的 发展基于ELISA的血清神经胶质酸性蛋白(glial fibnillary acidic protein,GFAP)自身抗体含量测定方法,用于脑胶质瘤患者的诊断。方法 克隆GFAP基因至pGEX 6p 1载体,使用大肠埃希菌中纯化得到的GFAP重组蛋白包被96孔板,经封闭后依次孵育稀释的血清样本和偶联HRP的羊抗人二抗,最后加入TMB底物显色,硫酸终止显色反应,测定各孔吸光度。结果 pGEX 6p 1 GFAP质粒在大肠埃希菌Rosetta菌株中表达产生了大量GFAP重组蛋白,所得蛋白经洗脱纯化后用作ELISA反应底物。ELISA实验中,脑胶质瘤患者血清D值明显高于正常人,差异有显著统计学意义。结论 使用GFAP作为抗原的ELISA实验可作为应用GFAP自身抗体进行脑胶质瘤患者血清诊断的一种候选方法。     

宫颈鳞状上皮FoxM1及Cdc25B细胞核内蛋白水平与高危型HPV感染的相关性研究

背景与目的：宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤,人乳头状瘤病毒（human papilloma virus,HPV）与宫颈癌/癌前病变的发生关系密切。宫颈组织活检RNA标本及宫颈癌细胞系中发现HPV 16 E7基因与FoxM1基因表达具有相关性。为发掘辅助诊断宫颈鳞癌及其癌前病变的免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）标志物,分析宫颈组织中高危型HPV感染（high-risk HPV,hrHPV）和转录因子FoxM1及其下游蛋白Cdc25B的细胞核内水平之间的相关性。方法：宫颈活检、锥切及子宫切除组织学标本来自复旦大学附属肿瘤医院病理科资料库（2007—2009年）,用于细胞核FoxM1和Cdc25B蛋白IHC检测,并与23种基因型HPV DNA检测以及P16INK4a（P16）和Ki-67之IHC结果比较。结果：包括22例正常、28例CIN1、50例CIN2/3和40例鳞癌在内共计140例入组。CIN2+中hrHPV感染率100%（90/90）,FoxM1、Cdc25B、P16和Ki-67阳性率分别为100.00%（90/90）、94.44%（85/90）、85.56%（77/90）和97.78%（88/90）,且上述标志物阳性率均随宫颈病变严重程度加剧而上升（Jonckheere-Terpstra检验,P均＜0.000 1）。FoxM1和Cdc25B表达与hrHPV感染、P16和Ki-67阳性率相关（Spearman相关检验,P均<0.000 1）。FoxM1和Cdc25B诊断CIN2+效果佳,曲线下面积（area under curve,AUC）值分别为0.850和0.822。结论：人宫颈鳞状上皮中细胞核FoxM1和Cdc25B蛋白水平与hrHPV感染相关,有望成为诊断与鉴别诊断CIN2+的潜在辅助指标。