EB 病毒Rta 优势表位抗原的克隆表达及在应用ELISA 诊断鼻咽癌中的价值

目的　制备高活性EB 病毒立即早期蛋白Rta 优势表位抗原，并初步评价该抗原在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC）诊断中的价值。方法　分析Rta 氨基酸序列，选取抗原优势表位Rta（301~440aa），合成目的基因， 连接pBVGST-6His 载体，构建重组pBV-Rta 表达质粒，进行诱导表达获得纯化抗原。采用间接ELISA 初步评价优势表 位抗原在鼻咽癌诊断中的价值，以纯化的pBV-Rta 优势表位抗原为包被抗原，抗人IgA，IgG 和IgM 为二抗，检测由烟 台毓璜顶医院提供的50 例经临床病理确诊的NPC 患者血清样本和90 例健康体检者血清样本。结果　获得了高效原核 表达的pBV-Rta 优势表位抗原(301~440aa)，经过小样本验证，确定pBV-Rta 具有良好的抗原活性和特异度。放大样本 进行检测，基于Rta 优势表位抗原的Rta-IgG 间接ELISA 方法检测灵敏度和特异度分别为73.08% 和95.79%。Rta-IgG 检测的AUC 值为0.860。结论　Rta 优势表位抗原pBV-Rta 是优选的可以用于Rta-IgG 检测的抗原，利用该抗原所建立 的间接ELISA 检测方法可以很好地区分鼻咽癌患者和健康对照。     

EB病毒核抗原1优势表位区段抗原的克隆表达及其在鼻咽癌诊断中的应用

目的制备高活性EB病毒核抗原1(Epstein-Barr virus nuclear antigen 1, EBNA1)的优势表位区段抗原,并初步评价该抗原在鼻咽癌诊断中的应用价值。方法利用生物学软件BIOSUN分析EBNA1抗原的B细胞表位分布,并从中选取含有优势表位的抗原区段。然后利用分子生物学技术构建含有优势表位区段序列的原核表达质粒并进行表达,获得纯化优势表位抗原,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)初步评价优势表位区段抗原的检测性能。结果成功构建含有优势表位抗原区段序列的原核表达质粒,获得了可溶性表达的EBNA1优势表位区段抗原NA-2(401~641 aa)。通过间接ELISA法对小量样本进行验证,确定NA-2抗原针对EBNA1-IgA抗体具有较高的抗原活性和特异性,较EBNA1-IgG和EBNA1-IgM抗体而言,能够较好地区分鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)和健康对照样本。放大样本量进行检测,基于NA-2抗原的EBNA1-IgA抗体间接ELISA方法检测灵敏度和特异性分别为90.38%和91.58%,EBNA1-IgA抗体检测的AUC值为0.942。结论获得EBNA1优势表位区段抗原NA-2,该抗原是优选的可以用于EBNA1-IgA检测的抗原,利用该抗原所建立的间接ELISA检测方法可以很好地区分鼻咽癌患者和健康对照。