无胶筛分毛细管电泳法检测DNA的条件优化

<正>毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE),又称高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE),是20世纪80年代问世的一种高效液相分离法[1]。CE作为一种高效、微量、高灵敏度及自动化的分离分析方法,已在医学、生     

应用微流控电泳联合检测载脂蛋白C3基因型

目的 建立应用微流控电泳联合检测载脂蛋白C3(APOC3)启动子区2种基因型的方法.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增APOC3基因启动子区包含T-455C和C-482T多态性在内的DNA片段,产物分别用限制性内切酶BseGⅠ和MspⅠ酶切后同时进行微流控电泳,分析APOC3基因启动子区这2位点的基因型.结果 成功联合检测APOC3启动子区C-482T和T-455C多态性基因型.结论 应用微流控电泳联合检测APOC3启动子区2位点基因型方法可行,适合应用于常规实验或科研工作.     

RA伴贫血患者治疗前、后网织红细胞参数变化

目的检测活动性类风湿性关节炎(RA)伴慢性病贫血(ACD)患者网织红细胞参数的变化及临床意义。方法采用日本Sysmex XE-2100全自动五分类血细胞分析仪,检测治疗前、后80例RA伴ACD患者和40例正常对照者的网织红细胞百分数(Ret%)、高散射光网织红细胞百分数(HFR%)、网织红细胞不成熟度(IRF),比较抗风湿药治疗前、后患者Ret%、HFR%、IRF的变化。结果治疗前Ret%、HFR%、IRF较对照组均降低;经抗风湿药治疗后Ret%、HFR%、IRF值升高,IRF值升高的程度更明显。结论 Ret参数的检测有助于了解RA伴贫血患者治疗前、后骨髓红系生长情况,IRF能够敏感地反映治疗后患者的贫血改善程度,可作为患者治疗效果监测的有效手段。     

南通地区健康人群血清NSE电化学发光法检测参考区间的调查

目的 调查和建立南通地区表观健康人群神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)的参考值区间。方法 选取2017年1月～2018年1月南通大学附属医院体检中心3 874例健康体检者作为研究对象,其中男性2 767例,女性1 107例,通过问卷调查和体格检查排除神经系统、血液病、炎症、肿瘤等疾病,采用罗氏cobase 411全自动电化学发光仪检测NSE水平。根据性别、年龄将受检者分组(男女各7组:<30岁,30～39岁,40～49岁,50～59岁,60～69岁,70～79岁,>80岁),对结果进行统计学分析,建立相应的参考区间。分析性别、年龄分组后的组间差异是否有统计学意义; 将获得的参考区间与试剂盒提供的生物参考区间进行比较,并进行参考区间的验证。结果 NSE水平呈正态分布,男性血清NSE水平(15.79±3.52ng/ml)明显高于女性(13.79±3.04 ng/ml),差异有统计学意义(t=3.102,P=0.037)。但独立样本t检验进行各年龄组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。采用(-overx)&#177; 1.96s确定参考区间,NSE参考区间为8.47～21.07 ng/ml,男性为8.72～21.36 ng/ml,女性为8.06～20.10 ng/ml,对该研究建立的NSE参考区间进行验证符合标准。结论 初步建立了适合该地区表观健康人群的血清NSE参考区间。NSE的参考区间有性别差异,根据不同性别建立的参考区间,可为疾病的诊断和治疗提供准确的依据。     

XE-2100血常规分析仪对异常白细胞报警的可信度评价

目的 探讨XE-2100血细胞分析仪对异常白细胞的检测能力.方法 对209例XE-2100全自动血液分析仪提示白细胞分类有异常的标本及541例无异常白细胞分类报警的标本进行手工推片、瑞氏染色镜检.结果 将仪器报警信息与镜检结果进行比较,其异常情况报警系统的灵敏度97.6%,特异性为92%,阳性预示值为78.5%,阴性预示值为99.2%,检出有效率为93.4%.结论 Sysmex XE2100全自动血细胞分析仪对形态异常白细胞的提示具有很高灵敏度,但对于有异常白细胞报警信息的可疑标本进行显微镜复检很有必要.     

PT-der法和免疫比浊法测定纤维蛋白原的比较

目的 :将测定纤维蛋白原的PT -der法和免疫比浊法进行比较。方法 :利用凝血酶原时间导出纤维蛋白原法 (PT -der法 )和单克隆抗体免疫比浊法 ,平行测定 14 1例病人和 2 0例健康人的纤维蛋白原水平。结果 :应用PT -der法和免疫比浊法测得的正常组血浆纤维蛋白原无显著差异 (P >0 .0 5 )。而其它各组病人标本两种方法测得纤维蛋白原有显著的差异 ,且比浊法结果较PT -der法集中。另外PT -der法测得的各组病人纤维蛋白原与正常对照都有显著性差异 ,而免疫比浊法测得的结果只有肝硬化、妊娠标本与正常对照有显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :结果提示PT -der法较敏感、特异 ,利用PT -der法对纤维蛋白原水平的监测及临床治疗较免疫比浊法优越。     

耐药miRNA与血液系统恶性肿瘤

摘要： miRNA是一类高度保守的非编码内源性小分子RNA,在转录后水平负调控基因表达,从而参与一系列重要生命过程。近年来的研究表明,miRNA参与调控血液肿瘤多药耐药,其可作为逆转血液肿瘤耐药的高效靶点,具有广阔的临床应用前景。本文主要讨论miRNA与血液肿瘤耐药关系的研究进展。     

串联siRNA干扰沉默结肠癌SW480细胞APRIL基因表达

目的 检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体(APRIL)基因的影响.方法 设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段(sh644、sh1451、sh1938、sh2231),分别将其连接至pGenesil-1.1质粒表达载体,形成pGsh644、pGsh1451、pGsh1938、pGsh2231单一表达载体,同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联siRNA表达载体.阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480.实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SW480细胞中APRIL mRNA和蛋白表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,构建的串联siRNA质粒载体符合要求.几条siRNA均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达,APRIL mRNA的抑制率分别是pGsh644(56.2％)、pGsh1451(49.5％)、pGsh1938 (50.9％)、pGsh2231 (49.2％)、pG4(79.3％).蛋白质表达抑制率分别为pGsh644(56.9％)、pGsh1451(48.7％)、pGsh1938(50.1％)、pGsh2231 (46.4％)、pG4 (87.5％) (P＜0.05).其中以pG4抑制效应最强.结论 与传统单一的siRNA表达载体相比,串联siRNA表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达,为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础.     

XE-2100血细胞分析仪两种血小板计数方法的比较

目的:探讨XE-2100血细胞分析仪阻抗法(PLT-I)、激光法(PLT-O)检测血小板的准确性。方法:以传统手工法为参照,对PLT-I法、PLT-O法进行精密度、线性、携带污染试验,并用三种方法平行检测40例正常体检标本和40例PLT异常的血液病患者标本。结果:PLT-O法与PLT-I法批内、批间重复性CV值<5%,且两法线性关系较好,r值均为0.997,携带污染率两法均<0.8%,当PLT<50×109/L时,PLT-I法测得PLT结果低于手工法(P<0.05%)。结论:PLT-O法对PLT检测准确性高,尤其低值标本须两种方法联合检验,两者结果相差较大时应以手工复检为准。