M13噬菌体多克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法：将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增,以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫,收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清,用间接ELISA法对免免疫血清的效价进行检测,进一步用免疫斑点实验检测免多克隆抗体与M13K07辅助噬菌体的特异性结合能力。结果：M13K07辅助噬菌体免疫兔可产生高效价的多克隆抗体,效价达1：3200,并能特异性识别M13K07辅助噬菌体。结论：成功制备了高效价的M13K07辅助噬菌体多克隆抗体,为噬菌体展示技术研究提供了检测抗体。     

甲状腺乳头状癌中BRAF~(V600E)蛋白表达与基因突变的一致性及其临床意义

目的探讨甲状腺乳头状癌中BRAF~(V600E)蛋白表达与基因突变的一致性及其临床病理相关性。方法分别采用免疫组化SP法与实时荧光定量PCR法检测BRAF~(V600E)蛋白表达与基因突变情况,分析两种检测方法间的一致性;采用χ~2检验分析BRAF~(V600E)与甲状腺乳头状癌的临床病理相关性。结果 BRAF~(V600E)基因突变率为89.3%,蛋白阳性率为88.3%,差异无统计学意义;两种检测结果的符合率为97.0%,Kappa值为0.847,一致性较强。患者年龄45岁与≥45岁组的BRAF~(V600E)基因突变率分别为96.8%、85.9%,差异有统计学意义;两种检测方法在有被膜侵犯组的阳性率均高于无被膜侵犯组,差异有统计学意义。结论两种检测方法存在较强的一致性,免疫组化法可以作为检测基因突变的初筛工具。BRAF~(V600E)基因突变与患者年龄、被膜侵犯相关,与其他临床病理特征无相关性。     

宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法的建立及意义

目的：建立宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法,分析宫颈癌发生各时期的HPV16早期基因E6相关转录的情况。方法：留取HPV16阳性的宫颈肿瘤组织63例,包括8例低度鳞状上皮内瘤变（LSIL）、38例高度鳞状上皮内瘤变（HSIL）和17例宫颈癌,提取RNA,利用含保守序列的RT引物将标本中的mRNA反转录成5’端含保守序列的cDNA,并利用HPV16E6特异性引物（P1）和保守序列（P0）进行PCR扩增,建立特异性扩增HPV16E6相关转录本的方法,检测标本中HPV16E6相关的转录本,通过E6特异性探针进行Southern杂交加以验证。结果：成功建立了HPV16E6相关转录模式分析的方法。经分析HPV16阳性的LSIL、HSIL及宫颈癌组织中E6转录模式结果发现,不同级别HPV16阳性的宫颈肿瘤组织的转录模式差异显著。随着LSIL向宫颈癌发展,肿瘤组织中HPV16E6转录本种类增多,且优势转录模式逐渐清晰。结论：成功建立HPV16E6相关转录模式分析的方法,并发现HPV16早期基因E6相关的转录模式与宫颈肿瘤癌变程度密切相关,其可能参与宫颈癌的发生和发展。     

肺腺癌新分类各亚型与EGFR突变的相关性

目的：探讨肺腺癌新分类[2011年国际肺癌研究会（IASLC）/美国胸科协会（ATS）/欧洲呼吸协会（ERS）肺癌多学科协作组更新的非小细胞肺腺癌的分型标准]各亚型与表皮生长因子受体（EGFR）突变之间的关系。方法：共纳入240例手术切除的非小细胞肺腺癌患者。采用ARMS法对所有手术标本行EGFR突变检测。卡方分析比较不同病理亚型与患者EGFR突变发生率的关系。结果：纳入EGFR突变检测的240例患者中,大部分属于腺泡状（占89%）和乳头状（占56%）肺腺癌类型。EGFR在腺泡状、贴壁状、乳头状以及微乳头为主腺癌亚型的发生率高于非该亚型的肺腺癌（P＜0.05）;实性为主腺癌亚型EGFR突变发生率低于非实性为主腺癌亚型（P＜0.05）。结论：不同的腺癌病理亚型EGFR突变发生率存在差异,其中腺泡状为主亚型、微乳头为主亚型、乳头状为主亚型和贴壁状为主亚型的突变发生率较高,实性为主腺癌亚型突变发生率较低。