球状脂联素对卵巢微血管内皮细胞增殖、迁移及管状结构形成的影响

目的 分离并鉴定小鼠卵巢微血管内皮细胞,并利用卵巢微血管内皮细胞研究球状脂联素对小鼠卵巢血管新生的影响.方法 采用Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠卵巢微血管内皮细胞,并采用免疫荧光检测细胞表面的卵泡刺激素受体、黄体生成素受体以及血管内皮细胞标记vWF;通过血管生成因子(VEGFA)处理检测卵巢微血管内皮细胞在Matrigel上的毛细管形成特性.重组的球状脂联素蛋白处理卵巢微血管内皮细胞,通过MTS检测细胞增殖;细胞划痕愈合法检测细胞迁移;Matrigel基质胶的血管形成,Western blot检测单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化激活.结果 分离出的细胞表现为卵泡刺激素受体阴性,黄体生成素受体阳性,vWF阳性,且VEGFA能够促进血管生长,具有卵巢特异的血管内皮生长特性.高剂量浓度(1 μg/mL和3μg/mL)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管内皮细胞数量分别增加(158.72± 14.50)％和(186.50±4.20)％,促进细胞增殖(P＜0.01);高剂量浓度(1μg/mL和3μg/mL)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管划痕愈合率分别为(49.43±3.43)％(P＜0.05)和(69.67±1.2)％(P＜0.01);3μg/mL的脂联素处理卵巢微血管内皮细胞形成的毛细管状长度为对照组的7.63±0.66倍(P＜0.01).3μg/mL的球状脂联素蛋白处理饥饿处理后的卵巢微血管内皮细胞培养15 min后pAMPK/AMPK、30 min后pAMPK/AMPK显著高于未加入蛋白处理的对照(P＜0.01).Compound C抑制了球状脂联素促进的卵巢微血管内皮细胞的管状结构形成及AMPK磷酸化激活.结论 成功分离了卵巢微血管内皮细胞,球状脂联素蛋白能够通过激活AMPK信号途径促进卵巢微血管内皮细胞的血管新生.