利用shRNA慢病毒高效敲降雄性小鼠睾丸基因

目的：建立快速、高效制备小鼠睾丸基因敲降的平台。方法：设计和构建靶向睾丸特异性表达基因Sox30转录本的 shRNA表达载体（pSliencer-GFP-shSox30）及其对照质粒（pSliencer-GFP-shScramble）,与慢病毒颗粒包装后通过网微注射转导至出生24 d小鼠睾丸生精小管管腔,利用免疫荧光等检测慢病毒敲降鼠体内靶向基因的效率及敲降Sox30后对生殖细胞发育的影响。结果：慢病毒处理敲降后,相比对照组小鼠,shSox30病毒敲降组小鼠睾丸组织中Sox30蛋白表达水平显著下调,生精管腔中圆形精子发育阻滞在2~3步,Ⅶ~Ⅷ期生精管腔中无长型精子。结论：shRNA慢病毒有效降低小鼠睾丸靶基因的表达水平,在制备睾丸特定基因敲降动物模型中具有巨大优势。