雌二醇通过上调IRE1α-XBP1信号轴抑制小鼠腹腔巨噬细胞的分化

目的 研究雌二醇其通过内质网应激通路影响巨噬细胞免疫特性的可能机制。方法 提取C57小鼠腹腔巨噬细胞,IFN-γ60 ng/mL作用下体外培养巨噬细胞,分组检测雌激素对巨噬细胞影响：实验组为雌二醇（1.0 nmol/L）处理;抑制剂组为雌二醇（1.0 nmol/L）和雌激素受体拮抗剂（Acolbifene, 4 nmol/L）同时作用;对照组加等量PBS处理,培养48 h后通过Western blot法检测比较巨噬细胞极化蛋白MHC-II、iNOS和内质网应激标志性蛋白IRE1α、eIF2α和ATF6的表达水平,通过RT-PCR法检测巨噬细胞TGF-β、IL-6、IL-10、TNFα mRNA水平变化。随后分组检测内质网应激对巨噬细胞的影响：雌激素处理组;雌激素和内质网IRE1α信号抑制剂（4 μ 8 C,50 μmol/L）处理组;IRE1α激动剂组（TG,0.2 nmol/L）处理组;对照组加等量PBS处理,随后检测巨噬细胞的分化情况。结果 和对照组比较,雌激素处理后巨噬细胞M1相关蛋白MHC-II （P=0.021）和iNOS（P<0.001）表达显著降低,促炎细胞因子TNF-α（P=0.003）和IL-6 mRNA（P=0.004）表达下调,抗炎的M2型细胞因子TGF-β（P=0.002）和IL-10（P=0.008）mRNA表达上升,同时发现内质网相关的IRE1α（P<0.001）蛋白活化水平升高,其下游转录因子XBP-1（P<0.001）表达上调,加入雌激素受体阻断剂能够改变这种变化。和单纯雌激素处理组比较,在培养基中加入雌激素的同时加入IRE1α抑制剂4 μ 8 C会导致巨噬细胞 M1 相关蛋白 MHC-II（P=0.002）和 iNOS（P=0.003）表达显著上调,促炎细胞因子 TNF-α（P=0.003）和 IL-6mRNA（P=0.024）表达上调,抗炎的M2型细胞因子TGF-β（P<0.001）和IL-10（P<0.001）mRNA表达下调,而激动IRE1α通路会矫正这种变化。结论 雌激素能够通过上调IRE1α-XBP-1信号轴抑制巨噬细胞促炎表型的分化,从而对炎症反应发挥抑制作用。     

神经肽Y Y1受体拮抗剂促进大鼠BMSCs成骨分化和股骨缺损修复

目的探索神经肽Y Y1受体拮抗剂（PD160170）对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化以及骨缺损修复的影响。方 法第三代大鼠BMSCs成骨分化诱导培养,随机分为4组,对照组（等体积PBS）,终浓度分别为10-6、10-7、10-8 mol/L Y1受体拮抗 剂三浓度梯度组,在干预7、14 d时,分别进行碱性磷酸酶（ALP）和茜素红染色;在干预7、21 d时,采用q-PCR和Westen blot检测 I 型胶原（COLI）、骨钙素（OCN）和Runt相关转录因子2（Runx2）基因和蛋白的表达。采用300±20 g 雄性SD大鼠构建股骨髁 上骨缺损模型,直径为2.5 mm,随机分为3 组,每组6 只,分别每日局部注射0.2 mL溶液等体积PBS（对照组）、10-6 mol/L 和 10-8 mol/L Y1受体拮抗剂溶液,28 d后处死,Micro-CT检测观察骨缺损修复情况。结果ALP和茜素红染色发现,Y1受体拮抗 剂组细胞胞浆内棕色颗粒、细胞外周基质矿化结节均高于对照组,且具有浓度特异性,以10-8 mol/L最为明显;q-PCR及Westem blot检测发现,在成骨分化诱导第7天,10-8 mol/L Y1受体拮抗剂组COLI mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组,差异具有 统计学意义（P<0.05）;在第21天,10-8 mol/L Y1受体拮抗剂组OCN、Runx2 mRNA和蛋白表达明显高于对照组（P<0.05）。通过 micro-CT分析发现,在局部注射10-6 Y1受体拮抗剂28 d后,骨缺损BV/TV、骨密度、骨小梁数量高于对照组,差异均具有统计学 意义（P<0.05）;而骨小梁厚度（P=0.07）、骨体积（P=0.35）在各组之间差异无统计学意义。结论神经肽Y Y1受体拮抗剂可促进 BMSCs成骨分化以及骨缺损的修复,提示阻断Y1受体信号传导具有预防或治疗骨折、骨质疏松症等潜力,为临床药物研究提 供一定的实验依据。