人胰岛新生相关蛋白基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

目的 在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP),用于INGAP的生理功能研究和动物试验.方法 通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K的BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ之间,Sal Ⅰ酶切线性化重组质粒INGAP/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的 基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定目的 蛋白,用ELISA定量测定生物学活性.结果 成功构建了重组表达质粒INGAP/pPIC9K,筛选得到3个阳性转化子,表达产物具有良好的抗原活性.结论 实现了rhINGAP在毕赤酵母中的高效分泌性表达.     

糖尿病足部非缺血性溃疡皮肤血管内皮生长因子受体3的表达☆

背景：糖尿病足部溃疡的发病机制和溃疡修复的机制尚不清楚，有研究表明和炎症反应延迟有关，而炎症和淋巴管形成关系密切。 目的：探讨糖尿病足部非缺血性溃疡淋巴管内皮标志物血管内皮生长因子受体3表达。 设计、时间及地点：分组对比观察，于2007-06/2008-05在南方医科大学南方医院内分泌代谢科完成。 材料：标本来自2007-05/2008-03南方医院内分泌代谢科、急诊科、创骨科患者自愿捐献皮肤组织。分为正常对照组10例，男6例，女4例，平均年龄（51.2±4.1）岁；非糖尿病足溃疡组10例，男6例，女4例，平均年龄（55.2±4.7）岁，溃疡出现时间为（67.3±10.1）d；糖尿病足溃疡组10例，男5例，女5例，平均年龄（52.3±4.7）岁，溃疡出现时间为（64.0±10.4）d。 方法：采用半定量反转录-聚合酶链反应的方法检测3组皮肤中血管内皮生长因子受体3mRNA的表达。采用免疫组织化学的方法检测以上3组皮肤中血管内皮生长因子受体3蛋白表达。 主要观察指标：①反转录-聚合酶链反应结果。②免疫组织化学各组阳性细胞定位，表皮组织中阳性细胞数量，真皮组织中积分吸光度值。 结果：与正常对照组比较，非糖尿病足溃疡组血管内皮生长因子受体3mRNA表达增加（P < 0.001），糖尿病足溃疡组表达减少（P < 0.001）。正常组皮肤表皮层基底层细胞中可见明显的阳性细胞，非糖尿病足溃疡组和糖尿病足溃疡组表皮层基底层细胞阳性信号消失。正常对照组、非糖尿病足溃疡组和糖尿病足溃疡组真皮组织中血管内皮生长因子受体3积分吸光度值比较，差异有非常显著性意义（82.800±1.643，179.400±2.608，71.800±3.347，P < 0.01）。 结论：糖尿病足非缺血性溃疡血管内皮生长因子受体3表达减少，提示淋巴管形成减少。     

晚期糖基化终产物对健康成人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α和血红素加氧酶-1表达的影响

目的:探讨不同浓度晚期糖基化终产物(advanced glycation end-product,AGE)对健康成人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响。方法:分离健康成人外周血单核细胞,随机分组,利用不同浓度体外制备的AGE修饰牛血清白蛋白(AGE-BSA)刺激,观察不同时间点每组细胞培养上清液中TNF-α表达量及细胞内HO-1mRNA的表达。结果:AGE-BSA可增加健康成人外周血单核细胞TNF-α的释放并可诱导健康人外周血单核细胞内HO-1mRNA的表达。结论:AGE可上调健康人外周血单核细胞TNF-α和细胞内HO-1mRNA的表达。     

胰岛素泵治疗重症糖尿病24例

目的总结胰岛素泵在重症糖尿病患者中的疗效。方法选择糖尿病酮症酸中毒（DKA）和高渗性高血糖状态（HHS）共50例,随机分为胰岛素泵皮下输注组（CSII组）和常规小剂量胰岛素静脉滴注组（对照组）,观察两组疗效。结果 CSSII组血糖达标时间短,且胰岛素用量少,低血糖发生率低。结论胰岛素泵皮下输注组是用于重症糖尿病的一种安全有效的治疗手段。     

血红素加氧酶1在高糖和晚期糖基化终末产物诱导的THP-1细胞氧化应激中的作用

目的 探讨血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)在高糖和晚期糖基化终末产物(AGE)诱导的人单核细胞氧化应激中的作用.方法 根据是否加用15 mmoL/L葡萄糖(高糖)+100μg/ml AGE或HO-1抑制剂锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZnPP),将人单核细胞白m病细胞株THP-1细胞分为正常糖组(5 mmoL/L)、高糖+AGE组、高糖+AGE+ZnPP组、正常糖+ZnPP组,孵育24 h后收集细胞及培养液上清,榆测各组细胞的活性氧簇(ROS)、培养液上清丙二醛和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平以及HO-1 mRNA和蛋白的表达.结果 高糖+AGE组和正常糖+ZnPP组的ROS、丙二醛和TNF-α水平均显著高于正常糖组(均P<0.05).高糖+AGE+ZnPP组的ROS、TNF-α水平显著高于高糖+AGE组(均P<0.05).高糖+AGE+ZnPP组的HO-1 mRNA和蛋白表达水平显著低于高糖+AGE组(0.39+0.02±0.89 vs 0.09±0.384±0.00 vs 0.81±0.02,均P<0.05).结论 ZnPP通过抑制HO-1表达加重高糖和AGE导致的单核细胞氧化应激,HO-1可能在糖尿病氧化应激中起重要作用.     

人胰岛新生相关蛋白基因毕赤酵母表达载体的构建

目的 构建分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP)载体毕赤酵母.方法 通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K,Sal Ⅰ酶切线性化重组质粒αINGAP/pPIC9K.电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的 基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,Western blotting鉴定目的 蛋白,ELISA法定量测定其含量.结果 重组表达质粒αINGAP/pPIC9K经酶切获得758bp片段,符合α因子与INGAP片段融合的长度,筛选得到3个阳性转化子,培养上清含有与抗INGAP抗体反应的蛋白.结论 成功构建了分泌INGAP蛋白的毕赤酵母菌株.     

甲状旁腺功能减退症误诊15例分析

目的探讨甲状旁腺功能减退症(HP)的诊断及误诊原因。方法回顾泉州市180医院1998-01-2010-01收治的15例HP误诊病例,对临床资料进行总结和分析。结果误诊为癫痫8例,误诊为佝偻病4例,误诊为中毒性脑病2例,误诊为癔症1例。结论甲状旁腺功能减退症临床少见,容易误诊。对癫痫及反复手足搐搦者,应及时行血钙、血磷、血清甲状旁腺激素(PTH)测定,并行头颅CT或MRI检查。     

重组葡激酶加中药对重症急性胰腺炎大鼠心肌核转录因子кВ的激活作用

[目的]研究重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时心肌核转录因子кВ(NF-кВ)的活化及葡激酶的干预作用.[方法]63只SD大鼠随机分为假手术组(n=9)、对照组(n=27)、葡激酶合用益活清胰汤治疗组(n=27),SAP模型采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立.ELISA法测定6、12、24 h各时点血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,RT-PCR检测心肌NF-кВ mRNA的表达,免疫组化法检测心肌NF-кВ蛋白的表达,苏木精-伊红染色光镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化.[结果]术后6 h大鼠心肌NF-кΒmRNA及其蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高,治疗组用药后心肌NF-кВmRNA及蛋白表达下调,血TNF-α、IL-6明显下降,与对照组相比P＜0.05,治疗组胰腺及心肌组织的病理变化减轻.[结论]SAP大鼠心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-кВ活化有关,益活清胰汤合用葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用.     

西格列汀对初发2型糖尿病患者胰岛B细胞功能的影响

目的研究西格列汀对初发2型糖尿病患者胰岛B细胞功能的影响。方法选择我院门诊2型糖尿病患者69例,随机分为对照组和试验组,对照组35例,试验组34例,对照组予二甲双胍治疗,试验组予二甲双胍、西格列汀治疗,12周后比较治疗前后两组患者空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(PPG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、体重指数(BMI)、空腹胰岛素(Fins)、餐后2 h胰岛素(Pins)。结果两组治疗前各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组FPG、PPG、Hb A1c、BMI均较治疗前显著下降(P<0.05)。与对照组相比,试验组FPG、PPG、Hb A1c降低更明显(P<0.05),Fins、Pins水平升高更显著(P<0.05)。结论西格列汀能明显改善初发2型糖尿病患者的胰岛B细胞功能,在临床应用中安全有效。