shRNA沉默Sp1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响北大核心CSCD

目的探讨下调Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列,克隆入LV3(H1/GFP&Puro)载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平;克隆存活法检测细胞存活;流式法检测细胞周期;免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达,RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低(P<0.01),Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比(SER)分别为1.39和1.18;两株Sp1敲除组细胞经辐照后G2/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。结论shRNA沉默Sp1增大了X线诱导的G2/M期阻滞,加重了DNA双链断裂程度,提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。     

shRNA沉默Sp1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的 探讨下调Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法 设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列,克隆入LV3（H1/GFP&Puro）载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平;克隆存活法检测细胞存活;流式法检测细胞周期;免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果 两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达,RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低（P<0.01）,Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比（SER）分别为1.39和1.18;两株Sp1敲除组细胞经辐照后G₂/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。结论 shRNA沉默Sp1增大了X线诱导的G₂/M期阻滞,加重了DNA双链断裂程度,提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。     

干细胞、肿瘤干细胞和肿瘤关系的探究

近年来,恶性肿瘤的发病率已上升到疾病谱的第二位,成为严重威胁人类生命和健康的疾病。其主要特征是肿瘤细胞的恶性生长、转移及复发,病因和发病机制尚不清楚。最近研究认为,肿瘤中存在一小群具有自我更新和分化潜能的细胞即肿瘤干细胞,可能是肿瘤转移和复发的根源。正常干细胞和肿瘤干细胞均具有自我更新和多向分化的潜能,有相类似的标记物,一定条件下可以互相转化。间质干细胞（MSC）作为间质细胞的来源,与肿瘤的关系尤为密切。本文主要就干细胞尤其是间质干细胞,肿瘤干细胞和肿瘤的发生,发展作一综述。     

转录因子Sp1在DNA损伤修复中的作用及其与肿瘤治疗的研究进展

细胞受到外界刺激导致DNA损伤时，DNA修复蛋白被激活并发挥功能，受损DNA得到修复。近年来研究表明，转录因子特异性蛋白1(specificity protein 1，Sp1)在DNA损伤修复中起重要作用，是参与调控DNA损伤应答与修复的重要蛋白之一。Sp1在多种肿瘤中高表达，通过调节细胞增殖、迁移和侵袭促进肿瘤的发生和发展，不利于肿瘤治疗。本文首先介绍Sp1特有的结构及其生理功能，由此引入Sp1通过转录依赖方式调控DNA损伤应答，其次介绍Sp1通过非转录依赖方式参与DSB修复，以及Sp1在肿瘤治疗中的研究进展，最后展望研究Sp1的意义及可能具有的应用前景。