pitx3和nurr1基因在不同年龄大鼠不同脑区的表达变化

目的:探讨正常不同年龄SD大鼠不同脑区pitx3、nurr1基闪的表达变化.方法:使用RT-PCR、免疫印迹法和免疫荧光方法检测pitx3、nurr1基因在正常不同年龄SD大鼠不同脑区转录与翻译水平的表达.结果:RT-PCR、免疫印迹法检测显示,pitx3、nurr1基因在各年龄组火鼠中脑、大脑皮质、海马、纹状体、嗅球和下丘脑均有表达,其中在海马和中脑表达较高;在各年龄组中新生组表达最高,并随着年龄的增长表达呈下凋趋势;免疫荧光检测E16.5 d组和新生组的中脑和海马区观察到有大量Pitx3或Nurr1单标细胞和Pitx3/TH或Nurrl/TH双标细胞.结论:pitx3、nurr1基凶的表达小仅与中脑多巴胺能神经元,而且可能与儿茶酚胺类神经元的发育和生存维持有关;老年期pitx3、nurr1基因表达下降可能与脑老化和神经退行性变疾病.如帕金森病和老年性痴呆等有关.     

颈上交感神经节和单涎酸神经节苷脂联合移植抗帕金森病的实验研究

目的：观察颈上交感神经节（SCG）和单涎酸神经节苷酯（GM1）联合植入帕金森病（PD）大鼠脑内的抗PD效果及移植物的存活情况。方法：将用酶消化法制成的同种大鼠SCG细胞悬液和GM1立体定向植入PD大鼠损毁侧尾壳核内,比较单纯细胞移植组,联合移植组,上清液组和非移植组间及移植前,后诱发旋转行为的变化,移植6个月后移植区行组织学检查（HE,TH染色）。结果：两个实验组中的PD大鼠移植后的旋转行为较移植前和对照组明显改善,其中尤以联合移植组的旋转行为减少最为明显,而两个对照组的改善不明显,脑切片组织学观察可见实验组移植区内有存活良好的TH阳性细胞,联合移植组中的阳性细胞数目明显多于单纯细胞移植组。结论：1．GM1可提高SCG细胞在受体脑内的存活率,2．同种成年大鼠SCG细胞植入PD大鼠脑内可以存活,并可纠正PD大鼠的异常旋转行为。     

丹参注射液促帕金森病移植神经元存活的实验研究

目的　研究丹参注射液对帕金森病移植神经元的促存活作用。方法　用神经毒剂 6羟基多巴胺 ( 6 OHDA)单侧损毁SD大鼠左侧中脑被盖腹侧区 (VTA)和黑质致密部 (SNC)建立动物模型。实验分胚鼠腹侧中脑组织 (VM)移植组、丹参注射液干预组和空白对照组。采用原位末端标记法 (TUNEL)结合流式细胞术及免疫组化方法 ,对 3组移植神经元凋亡和存活情况进行定量分析 ,观察丹参注射液对帕金森病移植神经元的促存活作用。结果　根据TUNEL、酪氨酸羟化酶 (TH)染色和流式细胞仪检测结果 ,丹参注射液干预组较VM移植组移植神经元凋亡率降低 ,凋亡细胞数减少 ,纹状体移植针道和针道周围都可见大量THir阳性细胞 ,而且THir阳性神经元数量明显增多。结论　丹参注射液对帕金森病移植神经元具有促存活作用。     

胰腺癌组织中P21(WAF1)、转化生长因子α、表皮生长因子受体表达与神经浸润转移的关系

目的:探讨P21(WAF1)、转化生长因子α(TGF-α)、表皮生长因子的受体(EGFR)表达与胰腺癌神经浸润转移关系。方法:用免疫组织化学方法检测胰腺癌31例及其对应癌旁组织中P21(WAF1)、TGF-α、EGFR蛋白表达水平。结果:P21(WAF1)、EGFR蛋白表达水平与胰腺癌神经浸润转移相关(P<0.05)。TGF-α、EGFR共同表达在有无神经浸润转移者之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:P21(WAF1)的低表达、EGFR的过量表达,TGF-α/EGFR自分泌环可能在胰腺癌神经浸润转移中也起着重要的作用。     

胰头后面神经分布的应用解剖学研究

目的：观察胰头后面的神经分布，探讨胰头癌沿神经浸润转移的解剖学基础，为临床上清除由于胰头癌神经浸润转移所致的残留癌以及胰源性疼痛止痛术等提供相关的应用解剖学资料。方法：运用大体解剖学方法观测了30具成人尸体胰头后面神经分支的来源和分布特征。结果：（1）胰头后面的神经分支主要来源于右腹腔神经节（27例）、腹腔丛右侧半（20例）和肝丛（16例），少数发自肠系膜上丛（14例）。（2）胰头后面神经分布形式以成丛型．即“胰头丛”占多数（24例），仅有6例为不成丛型。（3）“胰共丛”的位置较恒定，肾贴于胰头后面，邻接下腔静脉和左肾静脉的末段。胰头后面神经分支进入胰头后面腺体的部位以右上、下象限为主（分别有21例和26例），其次为左下象限（14例），而左上象限最少（3例）。结论：胰头后面的神经分布丰富，其来源和分布具有一定的规律性和特点，为胰头癌神经浸润转移和术后局部肿瘤复发提供了可能，也是导致中、晚期胰腺癌剧烈疼痛的形态学基础。     

射血分数正常的中重度心衰患者血压变异性和N端脑钠肽前体的关系

目的探讨中重度射血分数正常心衰(HFp EF)患者血压变异性(BPV)和N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)的关系。方法选取中重度HFp EF患者72例,采用电化学发光免疫法测定其血清NT-pro BNP含量,并用动态血压监测仪获取患者24小时动态血压信息,分析血清NT-pro BNP水平与BPV的关系。结果 (1)不同NT-pro BNP水平组间收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和舒张压变异性(DBPV)的差异具有显著的统计学意义(P0.05),且SBP、DBP、DBPV随着NT-pro BNP水平的升高而降低。(2)NT-pro BNP对数转换值和SBP、DBP、DBPV呈线性负相关。(3)调整性别、年龄、体质指数(BMI)、是否具有高血压病史后,NT-pro BNP转换值和SBP、DBP和DBPV的线性关系依然存在(P0.05)。结论 DBPV与中重度HFp EF患者NT-pro BNP水平相关,且能在一定程度上反映心衰的状态。     

强骨饮对CKIP-1过表达成骨细胞的影响研究

目的:观察强骨饮对酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(CKIP-1)过表达慢病毒感染的体外小鼠成骨细胞的调控情况,研究强骨饮治疗骨质疏松的分子作用机制。方法:从2d龄SD乳大鼠分离成骨细胞,构建CKIP-1过表达慢病毒,将成骨细胞分成4组:a组为空白成骨细胞对照组,b组为空载慢病毒感染的成骨细胞,c组为CKIP-1过表达慢病毒感染的成骨细胞,d组为CKIP-1过表达慢病毒感染成骨细胞+强骨饮处理。qRT-PCR检测成骨抑制基因CKIP-1和成骨相关基因ALP及RUNX2的表达,CKK-8检测细胞相对数目,茜素红染色鉴定成骨细胞,低倍光镜下观察钙化结节计数。结果:qRT-PCR检测:相比a组、b组,c组的CKIP-1有较高表达,差异有统计学意义(P0.01),RUNX2和ALPL表达水平极低,差异有统计学意义(P0.01);c组与d组比较,d组的CKIP-1表达水平显著降低,差异有统计学意义(P0.01),RUNX2和ALPL表达显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。CKK-8检测:相比a组、b组,c组的细胞增殖水平显著降低,差异有统计学意义(P0.01);相比c组,d组强骨饮处理后,细胞增殖比例有升高的趋势,且差异有统计学意义(P0.01)。茜素红染色:相比a组、b组,c组钙化结节明显减少;相比c组,d组钙化结节显著增多。结论:CKIP-1过表达对成骨细胞的增殖、成骨分化及矿化有明显抑制作用,强骨饮能提高CKIP-1过表达病理状态下成骨细胞的活性和成骨分化及矿化能力。     

当归补血汤含药血清体外诱导耳蜗干细胞的增殖分化

目的：观察当归补血汤对耳蜗干细胞体外诱导分化的影响,并探讨浓度对其的影响。方法：分离新生大鼠Corti器的耳蜗干细胞进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,用Nestin免疫荧光法进行耳蜗干细胞鉴定。采用不同剂量当归补血汤进行诱导分化后,采用MyosinⅦA、P27~(KIP1)免疫荧光方法,鉴定内耳毛细胞和支持细胞,并进行细胞计数。结果：当归补血汤细胞诱导分化的内耳毛细胞和内耳支持细胞数量明显较对照组多,其中剂量为0．5 g/ml组向内耳毛细胞的分化比例最高。结论：当归补血汤可以提高耳蜗干细胞体外分化为内耳毛细胞和支持细胞的数量。其中剂量0．5 g/ml组向内耳毛细胞的分化数量较高。     

胶质细胞源性神经营养因子对培养的胚鼠脑室下区神经干细胞表达Pitx3及酪氨酸羟化酶的影响

目的:观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对培养的胚鼠脑室下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)表达Pitx3、酪氨酸羟化酶(TH)的影响。方法:取胚鼠SVZ组织,进行细胞培养。分为GDNF NSCs共培养组和NSCs单独培养对照组。用Pitx3、TH、Pitx3/TH免疫荧光单标和双标及Nestin免疫组化法进行检测。结果:共培养组5 d时形成神经球,10 d时球体积不断增大,12 d后开始贴壁生长,并向四周伸出突起并开始分化。对照组神经球明显少于共培养组。14 d共培养组Pitx3、TH、Pitx3/TH阳性细胞明显高于对照组。结论:GDNF能上调SVZ区NSCs表达Pitx3和TH,诱导NSCs向多巴胺(DA)能神经元分化。     

ERβ基因敲除小鼠的繁殖、鉴定及检测

目的繁殖和鉴定出足够数量的ERβ基因敲除雌性小鼠,建立ERβ基因敲除雌性小鼠骨质疏松性骨折实验动物模型基础。方法将引进的3对ERβ基因敲除小鼠饲养于屏障环境中,按遗传学规则进行繁殖3月后,引进2月龄遗传背景为野生型C57BL/6J种系雌鼠14只与纯合子雄性小鼠按2:1配对合笼扩增雌性杂合子小鼠再行分组繁殖,1月后获得较多数量的小鼠后,提取小鼠尾部组织DNA进行聚合酶链式反应(PCR)检测种系基因型,选取10只4月龄ERβ基因敲除纯合子雌性小鼠(βERKO)和10只野生型雌性小鼠(Sham)用MicroCT检测并比较胫骨近端骨小梁结构参数值,进行统计学分析。结果至分组开始繁殖第2个月,计有340只小鼠育出,经鉴定,ERβ+/+小鼠占23.5%、ERβ+/-小鼠占48.2%,ERβ-/-小鼠占28.3%、其中雌性54只,符合研究需要的动物数量较前5月增加近4倍,经过microCT检测4月龄的子代ERβ基因敲除雌性小鼠(βERKO)比较野生型雌性小鼠(Sham)骨小梁矿物质含量的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究引进遗传背景为野生型C57BL/6J种系雌鼠与纯合子雄性小鼠配对,是在短期内成功地大量繁育足...