基孔肯雅病毒定量反转录聚合酶链式反应绝对定量检测方法的建立

目的 建立检测基孔肯雅病毒实时荧光定量RT-PCR快检方法，为其实验室诊断与定量分析提供技术方法。方法 基于基孔肯雅及其相近虫媒病毒基因组序列的系统比对分析，筛选、鉴定基孔肯雅病毒特异性核酸序列，并以人GAPDH基因为内参照，设计引物、探针，采用L₉(3⁴)正交实验确定最佳反应条件，建立基于TaqMan探针法的基孔肯雅病毒qRT-PCR快检方法，并详细分析所建立方法的灵敏度、特异度、重复性及覆盖面。以克隆的检测靶标核酸片段为阳性品，制作标准曲线，建立绝对定量方法。结果 经系统优化，建立了基孔肯雅病毒实时荧光定量RT-PCR定性、定量检测方法，反应体系包括：基孔肯雅病毒、GAPDH内参照检测引物探针，RT/Taq酶混合液，反应缓冲液及阴阳性参考品。所建立方法与ECSA亚型ROSS株、IOL分支LR2006株，亚洲型181/25株以及2010东莞流行株均可获得阳性结果，而与所试其他18种黄病毒、甲病毒、布尼安属相近虫媒病毒无交叉反应，检测下限为580拷贝/mL。定量分析表明，在5.80×10²～5.80×10^10<...     

儿童糖尿病酮症酸中毒五例

儿童糖尿病酮症酸中毒五例陶惠娥，刘（南京铁道医学院附属医院儿科南京２１０００９）糖尿病在小儿期较少见，极易发生酮症酸中毒，我科自１９８４年至１９９３年收治５例儿童糖尿病酮症酸中毒患者，现报告如下。１临床资料１．１一般资料５例均为住院病人，其中男４例，...     

小儿肺炎支原体感染的早期诊断

探讨小儿肺炎支原体感染的早期诊断方法。方法：对３８５例呼吸道感染的住院患儿应用聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术检测咽拭子肺炎支原体ＤＮＡ，同时行血冷凝集试验（Ｃｏｌｄａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｔｅｓｔ，ＣＡＴ），进行配对资料研究。结果：不同年龄患儿呼吸道感染肺炎支原体发病情况有所不同。ＰＣＲ法检测肺炎支原体ＤＮＡ阳性率不受自然病程的影响，ＣＡＴ法检测阳性率则明显受到病程的影响。ＰＣＲ法阳性率为３８．１８％，ＣＡＴ法阳性率为１１．６９％，差异有极显著性意义。结论：咽拭子ＰＣＲ法检测肺炎支原体ＤＮＡ，不受病程、年龄因素的影响，具有特异、快速、敏感、标本易于采集等优点。