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目的 构建表达dsRNA的双向启动子以及靶基因AaCPR100A的大肠杆菌-苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315-AaCPR100A。方法 以苏云金芽孢杆菌pSVP27A质粒为模板通过PCR扩增苏云金芽孢杆菌Cry3A正向启动子Pro-1（+）；以埃及伊蚊RNA反转为cDNA为模板，扩增靶基因AaCPR100A；将大肠-苏云金穿梭载体pHT315质粒经HindⅢ和SalⅠ双酶切线性化；按照转录方向将正向启动子与靶基因通过无缝克隆插入穿梭载体pHT315中；以生物合成的含有Cry3A反向启动子序列的质粒为模版，经PCR克隆扩增Pro-1（-）反向启动子；将含有正向启动子与靶基因的中间载体通过Eco RⅠ限制性酶切酶线性化，按转录方向在靶基因下游通过无缝克隆插入反向启动子。结果 经琼脂糖凝胶电泳检测，正向启动子、靶基因AaCPR100A和反向启动子PCR产物条带清晰，质量良好，可用于无缝克隆实验；经无缝克隆连接双向启动子以及靶基因片段后，对含有重组载体pHT315-AaCPR100A的重组质粒进行PCR验证，在重组载体中成功扩增正向启动子、靶基因片段以及反向启动子，经核苷酸测序验证双向启动子... 相似文献
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