氟对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度的氟化物对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响。方法:采用酶消化法分离乳鼠成骨细胞,经剂量分别为0、2.5、5.0、10.0和20.0mg/L的氟化钠(NaF)作用后,采用免疫组织化学法和Western blot法检测染氟后小鼠成骨细胞中Ras蛋白表达水平。结果:免疫组织化学法结果显示0、2.5及5.0mg/L实验组成骨细胞中Ras均有较强阳性表达,其余实验组的为弱阳性表达;各染氟组阳性表达细胞数与0mg/L比较差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠细胞的Ras蛋白相对定量结果显示:2.5、5.0mg/L染氟组大于0mg/L,其它染氟组均小于0mg/L,染氟组的蛋白相对表达量有随着剂量增加而逐渐降低的趋势。结论:氟作用于成骨细胞后可以影响Ras蛋白的表达,表现为双向作用,即低剂量的氟促进Ras的蛋白表达,高剂量抑制Ras的蛋白表达。     

两种不同基质对体外培养成骨细胞的促贴壁生长影响

目的比较多聚赖氨酸(PLL)与鼠尾胶原对成骨细胞体外培养生长的影响。方法分别采用多聚赖氨酸(PLL)和鼠尾胶原铺制培养皿,然后接种成骨细胞。于24、48、72h镜下观察细胞形态及占培养皿面积的百分比。结果24 h PLL组,细胞贴壁呈均匀分布状,贴壁面积比为30.6%±12.9%。鼠尾胶原组细胞贴壁呈团状,贴壁面积比为42.5%±15.7%,差异显著;48hPLL组,细胞呈均匀分布生长,贴壁面积比为43.8%±14.5%。鼠尾胶原组,细胞团相互连接,生长面积比为61.3%±17.1%,差异显著;72hPLL组细胞相互连接生长面积比为56.3%±15.4%。鼠尾胶原组,细胞连成片,生长面积比为94.4%±14.1%,差异显著。结论对体外培养的成骨细胞而言鼠尾胶原促贴壁生长比多聚赖氯酸(PLL)更为适宜。     

乳鼠成骨细胞体外培养

目的建立乳鼠成骨细胞体外培养方法,探讨该方法的可行性和应用价值。方法用出生1~3 d乳鼠颅骨,采用多次胶原酶消化法进行细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态,对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定,并测定细胞生长曲线。结果原代培养24 h后,大量细胞贴壁生长,细胞呈圆形,48 h后,贴壁细胞呈长梭形、三角形或不规则多边形,并且贴壁细胞伸出2~3个突起,胞质透亮、饱满,7 d后细胞铺满整个平皿底面。经鉴定,培养细胞具有体内成骨细胞的生物学特性。细胞接种后第1与第2个24 h为细胞的潜伏适应期,第3与第7个24 h生长曲线基本为线性曲线,是细胞的对数生长期。结论采用胶原酶消化法分离培养成骨细胞的方法切实可行。     

氟化物对体外培养的小鼠成骨细胞增殖能力的影响

目的:观察氟化钠对体外培养的成骨细胞的增殖能力的影响。方法:采用四唑盐(MTT)比色法,观察不同剂量氟化钠在不同时间对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响。结果:剂量为2.5、5.0mg/L的氟化钠作用2d时,可使成骨细胞增殖活力较对照组明显增强;≥20mg/L时随着氟化钠剂量的增加和作用时间的延长,成骨细胞的增殖活力明显减弱。结论:氟化钠对成骨细胞的增殖呈现双向调节,且随时间的延长对细胞增殖能力的抑制逐渐增强。     

阿魏蘑菇对氢化可的松处理大鼠免疫调节作用的研究

[目的]研究阿魏蘑菇对大鼠免疫功能调节的效应,并初步探讨其机制。[方法]2003年2~8月运用氢化可的松制备免疫低下大鼠模型,50只SD大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、阿魏蘑菇高剂量组、阿魏蘑菇中剂量组、阿魏蘑菇低剂量组,每组大鼠10只,不同剂量阿魏蘑菇提取物干预14 d,测定几项免疫指标。[结果]阿魏蘑菇提取物高中低剂量组大鼠外周血白细胞数目分别为(6.08±0.64)、(4.86±0.77)、(5.02±0.52)×107/ml,明显高于模型组(3.24±0.51)×107/ml(P<0.01),提示阿魏蘑菇提取物可以升高免疫低下大鼠外周血白细胞数目;模型组大鼠半数溶血值(200.29±44.44)明显低于高中低剂量组(270.23±35.54)、(284.93±81.85)、(243.10±50.99);阿魏蘑菇提取物中低剂量组淋巴细胞增殖能力(0.071±0.016)(、0.053±0.018)高于模型组(0.038±0.017);阿魏蘑菇提取物高中低剂量组抗体分泌细胞功能(0.89±0.06)、(0.98±0.08)(、1.04±0.11)明显强于模型组(0.52±0.16);阿魏蘑菇提取物高中低剂量组大鼠血清白介素-1水平分别为(0.06±0.03)、(0.18±0.07)、(0.09±0.03),明显高于模型组(0.02±0.01)(P<0.01)。[结论]阿魏蘑菇提取物有增强免疫低下大鼠体液免疫应答和淋巴细胞增殖能力的作用,其机制与提高免疫低下大鼠IL-1分泌水平有关。     

氟对人成骨细胞TM9SF1和Ras mRNA表达的影响

目的 探讨氟对体外培养人成骨细胞中TM9SF1、Ras mRNA表达的影响.方法 采用原代细胞培养的方法培养人成骨细胞.取早期引产胎儿的骨组织,胶原酶消化、分离成骨细胞,加入DMEM培养液进行传代培养.将传代后的人成骨细胞按染氟剂量不同分为0(对照)、2.5、5.0、10.0、20.0 mg/L组.染氟培养10 d后,光镜下观察氟对人成骨细胞形态的影响:实时定量(RT)PCR法检测不同染氟剂量对体外培养人成骨细胞TM9SF1、Ras mRNA的表达影响.结果 光镜下对照组和2.5 mg/L组人成骨细咆呈长梭形、三角形或不规则多边形,有突起伸出,胞质透亮、饱满,相邻细胞彼此贴靠;20.0 mg/L组人成骨细胞呈长梭形或不规则多边形,细胞数目明显减少、体积变大,一些细胞胞质出现了多个小空泡及颗粒样物质.不同染氟剂量对人成骨细胞TM9SF1 mRNA表达的影响,组间比较差异有统计学意义(F=322.82,P<0.01);其中2.5 mg/L组(9326.0±115.97)表达最高,随着染氟剂量增加,TM9SF1 mRNA表达降低,5.0、10.0、20.0 mg/L组(6495.0±323.9、4387.5±545.2、5962.5±536.7)与对照组(9221.0±107.5)比较,差异有统计学意义(P均<0.01).不同染氟剂量对人成骨细胞Ras mRNA表达的影响,组间比较差异有统计学意义(F=703.28,P<0.01);其中对照组表达最高,随着染毒剂量的增加,Ras mRNA表达减少,2.5、5.0、10.0、20.0 mg/L组(6144.5±270.82、5603.5±88.39、3181.0±159.81、4067.5±37.4)与对照组(6571.0 ±196.58)比较,差异有统计学意义(P均<0.01).结论 氟影响人成骨细胞TM9SF1、Ras mRNA的表达,表达量的高低与染氟剂量有关.