应用荧光原位杂交技术筛选bcr基因探针及分析微小残留病

目的 定量检测慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）造血干细胞移植（ＨＳＣＴ）后ｂｃｒ基因重排。方法 应用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术，从ＣＥＰＨ酵母人工染色体（ＹＡＣ）文库的３个ｂｃｒ相关候选克隆中筛选探针，并对７例造血干细胞移植后病人进行检测，同时进行细胞遗传学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）分析。     

Alu—PCR联合荧光原位杂交技术鉴定bcr基因相关YAC克隆

目的：制备慢性髓细胞性白血病（CML)bcr基因重排的DNA探针。方法：应用Alu-PCR和荧光原位杂交（FISH）技术，对3个酵母人工染色体（YAC）候选克隆进行鉴定，制备DNA探针，并经正常人外周血淋巴细胞和慢性髓细胞性白血病患骨髓细胞筛选。结果：确定了YAC765E3为非嵌合体，定位于染色体22q11bcr基因区域，而且可在Ph染色体阳性细胞中易位至3q34。探针特异性杂交效率达95%。结论：FISH技术是染色体、染色体畸变鉴定和染色体上特殊序列定位的重要检测方法。联合应用Alu-PCR技术特异性扩增载体YAC中人类基因组来源的DNA制备探针，为慢性髓细胞白血病的诊断和监测微小残留病提供了一个新的手段。     

Alu-PCR联合荧光原位杂交技术鉴定bcr基因相关YAC克隆

目的制备慢性髓细胞性白血病（ＣＭＬ）ｂｃｒ基因重排的ＤＮＡ探针。方法应用Ａｌｕ－ＰＣＲ和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ） 技术,对３个酵母人工染色体（ＹＡＣ）候选克隆进行鉴定,制备ＤＮＡ探针,并经正常人外周血淋巴细胞和慢性髓细胞性 白血病患者骨髓细胞筛选。结果确定了ＹＡＣ７６５Ｅ３为非嵌合体,定位于染色体２２ｑｌｌ ｂｃｒ基因区域,而且可在Ｐｈ染 色体阳性细胞中易位至９ｑ３４。探针特异性杂交效率达９５％。结论ＦＩＳＨ技术是染色体、染色体畸变鉴定和染色体上特 殊序列定位的重要检测方法。联合应用Ａｌｕ－ＰＣＲ技术特异性扩增载体ＹＡＣ中人类基因组来源的ＤＮＡ制备探针,为慢性髓细胞白血病的诊断和监测微小残留病提供了一个新的手段。     

肝细胞癌P53基因突变和蛋白表达的研究

为了阐明Ｐ５３肿瘤抑制基因突变在人肝细胞癌发生和发展中的作用。应用聚合酶链反应－单链构象多态性银染技术和ＤＮＡ直接测序法研究了肝细胞Ｐ５３基因的分子结构改变，结果表明：３１％的病例显示有Ｐ５３基因突变，低分化癌的突变率显著高于高／中分化癌的突变率，突变主要集中于外显子７和１上显子８。免疫组织化学染色表明：４２例肝细胞癌中２２例有Ｐ５３蛋白的核内堆积，低分化癌，ＨＢｓＡｇ阳性病例和伴有肝硬化患者的Ｐ     

TNF诱导HL—60细胞凋亡的初步观察

目的为了研究肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的抗肿瘤机制,观察了ＴＮＦ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。方法用流式细胞分析及ＤＮＡ电泳分析检测ＨＬ－６０细胞发生凋亡的情况。结果ＴＮＦ（４０μｇ／Ｌ）处理细胞后,流式细胞仪分别在６０ｈ,８４ｈ出现凋亡特有的ＡＰ峰（分别占６３．５％、８５．６％）;琼脂糖凝胶电泳显现出特征性的ＤＮＡ“梯状”带。结论ＴＮＦ（４０μｇ／Ｌ）具有诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。推测ＴＮＦ的抗肿瘤作用可能与诱导细胞凋亡有关     

胆管癌p53基因突变和蛋白表达的研究

目的了解胆管癌ｐ５３基因突变和蛋白表达的变化。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测胆管癌中ｐ５３基因突变，并用亲和素－生物素－过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）免疫组织化学染色方法检测胆管癌ｐ５３蛋白的表达。结果１１例胆管癌中，３例胆管癌样品ＰＣＲ－ＳＳＣＰ单链电泳带迁移异常，依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，胆管癌ｐ５３基因５～８外显子的突变率为２７％；６例有ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为５５％。结论导致ｐ５３蛋白异常表达的ｐ５３基因突变是胆管癌的一种分子结构改变，可能在胆管癌的发生和发展中起着一定的作用。     

结直肠癌p53基因点突变和蛋白表达的研究

目的了解中国人结直肠癌ｐ５３基因的突变谱，探讨聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术用于研究结直肠癌中ｐ５３基因突变的可行性。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测４１例结直肠癌ｐ５３基因突变，以ＡＢＣ免疫组织化学染色检测结直肠癌Ｐ５３蛋白的表达。结果３４％（１４／４１）的病例显示有ｐ５３基因突变，其中外显子５，６，７和８各有４，１，５和４例突变。２０例有Ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为４９％。结论导致Ｐ５３蛋白异常堆积的ｐ５３基因突变是结直肠癌的一种常见的分子结构改变，可能在结直肠癌的发生和发展中起着重要的作用。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法     

结直肠癌p53基因点突变和蛋白表达的研究

了解中国人结直肠癌Ｐ５３基因的突变谱，探讨聚合酶链反应－单链构象多态银染技术用于研究结直肠癌中Ｐ５３基因突变的可行性。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测４１例结直肠癌Ｐ５３基因突变，以ＡＢＣ免疫组织化学染色检测结直肠癌Ｐ５３蛋白的表达。     

胃癌P53基因突变和蛋白表达的研究

为了解中国人胃癌Ｐ５３基因突变情况，应用银染聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对Ｐ５３基因第５、６、７、８外显子进行检测。对来自癌组织ＤＮＡ和癌旁正常组织ＤＮＡ的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳带迁移作对比分析，发现３７例胃癌中，１１例胃癌样品电泳带迁移异常，依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，研究结果表明：胃癌Ｐ５３基因５－８外显子的突变率为３０％。微波处理ＡＢＣ法检测突变型Ｐ５３蛋白表