终末期肾病患者血管平滑肌细胞凋亡情况及其影响因素分析

目的：观察终末期肾病（ESRD）患者血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡情况及其影响因素.方法：在ESRD患者行动静脉内瘘手术时留取桡动脉0.5～1 cm,共43例.年龄相匹配的因外周血管疾病行血管手术4例患者的动脉作为对照,对照组肾功能正常.采用DNA片段原位缺口末端标记技术（TUNEL法）检测上述二组动脉血管平滑肌细胞凋亡情况,结果用凋亡指数表示.临床指标包括血钙、血磷、钙磷乘积、全段甲状旁腺素（iPTH）、血浆白蛋白（Alb）、血红蛋白（Hb）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、C-反应蛋白（CRP）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）.采用Pearson相关分析计算凋亡指数与上述临床指标的相关性.结果：ESRD患者的动脉中膜可见到明显的VSMC凋亡,而在对照组血管中膜,只见到极少量凋亡的VSMC.ESRD患者的VSMC凋亡指数与临床指标中的血磷、钙磷乘积、LDL水平呈显著正相关（P＜0.05）.结论：ESRD患者动脉存在明显的VSMC凋亡;血磷、钙磷乘积和LDL升高可能是VSMC凋亡的促进因素.     

咪唑立宾对大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的探讨咪唑立宾（MZ）对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用及其对细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物p27^kip1表达的影响。方法大鼠系膜细胞同步后分为无血清组、20％FCS刺激组、20％FCS＋MZ组。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞数。BrdU标记法检测S期细胞。流式细胞仪检测细胞周期。Western印迹检测p27^kip1蛋白的表达。结果MZ可抑制20％FCS刺激所致的系膜细胞增殖，呈剂量依赖性。与20％FCS刺激组比较，20％FCS＋MZ组S期细胞的百分比显著降低[（10．28±1．26）％比（21．04±5．38）％，P〈0．05]。MZ可改善由20％FCS刺激诱导的GO／G1期细胞减少[（83．53±2．50）％比（71．15±1．25）％]和S期细胞增加[（12．22±1．22）％比（23．19±0．38）％，P〈0．051。20％FCS刺激后p27^kip1蛋白表达显著下降，MZ上调p27^kip1蛋白表达。结论MZ能够有效抑制系膜细胞增殖，作用时相在G1／S期转化，其抑制系膜细胞增殖的作用部分是通过上调p27^kip1蛋白表达实现的。     

肾穿刺活检石蜡组织切片DNA的提取和PCR扩增

目的建立从肾穿刺活检石蜡组织切片提取DNA并进行PCR扩增的方法。方法肾脏病理诊断为乙肝病毒相关性肾小球肾炎、原发性IgA肾病和膜性肾病各2例的肾活检组织蜡块，包埋时间1个月-5年。提取方法包括清洁切片、融蜡、消化及DNA的提取。紫外分光光度计测定DNA浓度。应用聚合酶链反应（PCR）扩增血管紧张素转换酶（ACE）和乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）基因片段。结果2张2Ixm厚石蜡切片获取的DNA总量为10-30μg。ACE基因的PCR扩增结果显示，6例标本均在490bp和（或）190bp处显示清晰条带。HBcAg的PCR扩增结果显示，2例乙肝病毒相关性肾小球肾炎标本在132bp处显示清晰条带，其余4例阴性。结论本方法可以从肾穿刺活检石蜡切片中获取足够高质量DNA并进行PCR扩增，方法简便，结果稳定，不受包埋时间长短的限制，为肾脏疾病的辅助诊断、肾活检组织的大宗遗传学分析提供了可能。     

系膜细胞增殖与细胞周期调节蛋白

<正>系膜细胞增殖是多种肾小球疾病的共同特征,包括免疫介导的肾小球疾病如IgA肾病、膜增殖性肾小球肾炎、狼疮肾炎;代谢性肾病如糖尿病肾病;血流动力学异常介导的肾病如5/6肾切除等。继发于系膜细胞增殖的细胞外基质(ECM)增多和肾小球滤过功能下降是慢性肾脏病(CKD)进展的重要原因。因此,调控系膜细胞增殖具有重要的意义。针对不同类型的损伤,肾脏的各种固有细胞可表现为增殖、肥大、凋亡、分化等,而不同细胞的不同反应决定了这种肾小球损伤的组织病理学和临床表现特征。这些细胞反应乍看上去毫不相关,实际上,细胞的最终命运是在细胞周期水平由共同的调控者——细胞周期调节蛋白决定的。     

肾小球系膜细胞一氧化氮合成酶细胞外基质合成影响的研究

目的研究体外培养的系膜细胞诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)表达水平对细胞外基质成分(IV型胶原、纤维连接蛋白)含量的影响。方法胎肾培养原代系膜细胞，取Ⅲ代细胞进行实验。采用TRLzolRNA一步法提取系膜细胞总RNA。半定量逆转录聚合酶链反应法(RT—PCR)测定iNOSmRNA表达，以β-action为内对照。酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中细胞外基质成分IV型胶原、纤维连接蛋白(FN)的含量。硝酸还原酶法检测培养液中NO的含量。对照组为RPMI1640 10％小牛血清(FGS) 1mM左旋精氮酸(L-arginine)，实验组为1脂多糖(LPS)10ug／ml，观察24h。结果系膜细胞中iNOSmRNA的表达；在未刺激的MC中无iNOSmRNA表达；刺激后4小时可检测到iNOSmRNA表达，6小时明显增加，24小时达到高峰；至48hr，iNOSmRNA表达仍继续增加。上清中的NO：(1)6小时LPS组与对照组无明显差别，24小时后LPS组NO含量增加：(2)LPS诱导的NO含量的增加可被L—NAME抑制。上清IV型胶原，FN含量：(1)4小时、6小时、24小时、48小时LPS组与对照组比较含量降低(P(O，05)(2)I。PS诱导的IV型胶原、FN的降低被L—NAME明显抑制。结论我们的研究发现肾小球MC确含有iNOS，且在生理状态下呈稳定状态，病理状态下iNOS表达上调；MC分泌的ECM与i—NOS表达有关；NO可降低ECM的含量，提示iNOS诱导的NO在肾小球硬化的发生和发展中起到了重要作用；各种因素对iNOS影响的最终结果是NO的变化．能够引起iNOS表达变化的各种因素均可引起NO含量的变化，从分子水平进一步证实肾小球MC-氧化氮合成酶的表达水平与细胞外基质密切相关。     

10例尿毒症钙化防御患者临床特点及预后分析

目的 总结尿毒症钙化防御患者的临床特点和预后情况.方法 纳入2019年1月1日至2019年12月31日于大连市中心医院肾内科确诊为钙化防御的尿毒症患者,回顾性分析其临床表现、病理表现及预后情况.结果 本研究共纳入钙化防御患者10例,男女比例为1:1,年龄(52.3±17.4)岁,中位透析龄120(60,153)个月,以...     

血流量对不同体重维持性血液透析患者透析充分性的影响

目的探讨血流量对不同体重维持性血液透析患者透析充分性的影响。方法选择我院血液透析中心维持性血液透析患者332例,记录患者干体重、超流量、计算KT／V、URR,根据KT／V是否达标将患者分为KT/V≥1．2和KT／V〈1．2两组,比较两组干体重、年龄、超滤量、血流量、KT/V和URR的差异。对KT/V〈1．2的大体重患者,在心血管状况和内瘘血流量允许的情况下,增加患者血流量,观察KT／V的达标率和KT／V、URR变化。结果1、332例患者中KT／V≥1．2的227例,占68．4％;KT/V〈1．2的95例,占31．6％。对KT／V≥1．2和KT/V〈1．2两组进行比较,发现：（1）两组间在年龄、超滤量、血流量方面无统计学差异（P〉0．05）;（2）干体重存在统计学差异（P〈0．05）,KT／V≥1-2组干体重显著低于KT／V〈1．2组（59．7±9．14vs73．3±11.3）;（3）KT／V≥1．2组URR显著高于KT/V〈1．2组（P〈0．05）。2、对KT/V〈1．2的大体重（平均体重73．8±8．5kg）患者,在心血管状况和内瘘血流量允许的情况下,对其中50例患者增加血流量,由以前平均血流量228．7±21．5ml／min升至调整后平均血流量2593±16．1ml／min,结果显示血流量增加前50例患者的KT／V均小于1．2,血流量增加后KT／V≥1．2的达23例,占46．0％,显著提高了KT/V的达标率。3、血流量增加后50例大体重患者的KT/V显著升高（1．17±0．15VS1．04±0．11,P〈0．05）,URR显著增加（0．63±0．05vs0．58±0．04,P〈0．05）。结论血流量对不同体重维持性血液透析患者透析充分性存在明显的影响,对体重较大的患者提高血流量后URR及KT/V明显提高耳．达标率增加,血流量是影响血液透析充分性的重要因素之一。