重组胸腺素α1 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌三角摇瓶培养条件的优化

目的对重组胸腺素α1pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌的培养条件进行优化。方法在摇瓶培养条件下探讨工程菌的生长和表达规律,对pMAL-C2x-Tα1/TB1菌种的培养基装量、接种量、诱导剂异丙基硫化半乳糖苷(IPTG)加入时间和浓度、诱导时间进行了实验和优化。结果由摇瓶培养获得的数据表明pMAL-C2x-Tα1/TB1最优培养条件为:10%接种量、100 mL LB培养基、37℃培养,接种后3 h,入终浓度为0.75 mmol/L的IPTG,诱导4 h后目的蛋白表达量最高。结论优化的培养条件为菌种的发酵工艺奠定了基础。     

Rapid preparation of animal mitochondrial DNA by nuclei/cytoplasm isolation

The mitochondrial DNA (mtDNA) possessesseveral special features, which have made it the subjectof intensive study in recent years. It is a comparativelysmall, circular DNA molecule located within the cytoplasmic compaltment away from the great majority Ofcellular DNA, which is localized within the nucleus.mtDNA is maternally inherited and exhibits a highmutation rate. Because of its special genetics, mtDNAmolecules of animal cells are used extensively in studies Of evolutionary genetic…     

重组胸腺素α1 pMAL-C2x- Tα1/TB1工程菌的构建与表达

目的构建表达重组胸腺素α1(Tα1)的pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌。方法将人工合成的Tα1序列进行PCR扩增,将扩增的片段和pMAL-C2x质粒载体分别经BamHI和EcoR I双酶切后,用T4 DNA快速连接酶连接构建pMAL-C2x-Tα1融合表达质粒,再经测序正确后,将重组体转化至大肠埃希菌TB1菌中,pMAL-C2x-Tα1/TB1菌在LB液体培养基中培养,经IPTG诱导表达麦芽糖结合蛋白与Tα1的融合蛋白(MBP-Tα1),采用Westernblot对MBP-Tα1进行鉴定。结果 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌能有效表达MBP-Tα1,融合蛋白占菌体蛋白的33.6%,分子量约为45×103。结论工程菌的成功构建和表达为重组Tα1的纯化、生物学活性等研究奠定了基础。     

松子壳多糖对小鼠主要免疫细胞功能的影响

目的探讨松子壳多糖(pine nut shell polysaccharide,PSP)对小鼠主要免疫细胞的影响。方法应用MTT法测定PSP对小鼠脾淋巴细胞的毒性和对ConA或LPS诱生小鼠脾T、B淋巴细胞的转化,用中性红吞噬试验测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能,应用乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞的杀伤活性。结果 PSP对脾细胞毒性很低,各种浓度对小鼠脾淋巴细胞的增殖均有较强的促进作用(P0.01);PSP在浓度50～300μg/mL时,明显促进T淋巴细胞的转化(P0.01),但是当浓度达到300μg/mL时表现出一定的抑制作用(P0.05);PSP在25～200μg/mL时显著促进了小鼠脾B淋巴细胞的转化(P0.05),但是当浓度达到300μg/mL时,抑制作用极显著(P0.01);不同浓度均可以增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力及其代谢功能,当浓度在100μg/mL时能显著的促进巨噬细胞吞噬中性红的能力(P0.01);PSP在浓度100～300μg/mL时,能极显著的促进NK细胞对Yac-1的杀伤作用(P0.01),当浓度达到400μg/mL,对NK细胞杀伤性的促进作用开始减弱。结论 PSP对小鼠脾淋巴细胞的毒性较低,能增强免疫细胞活性,有望成为新一代免疫调节剂。     

白藜芦醇减轻三氧化二砷所致大鼠过氧化毒性作用

目的探讨白藜芦醇（resveratrol,RES）减轻三氧化二砷对大鼠的毒性作用。方法腹腔注射三氧化二砷连续4周,治疗组在注射三氧化二砷前给予RES 30、60、120mg·kg^-1·d^-1。4周后取动物血清、肝、肺、脾及脑组织测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、丙二醛（MDA）、NO含量。结果与正常对照组相比,三氧化二砷引起动物血清、肝、肺、脾及脑组织NO和MDA水平显著增高,SOD和GSH—Px含量明显下降。RES治疗后显著改善三氧化二砷引起的上述变化,血清和肝、肺、脾及脑组织MDA、NO含量降低,而且总SOD、GSH—Px的活力均有明显升高,RES的作用呈剂量依赖性。结论RES可保护抗过氧化酶活性和抑制过氧化物产生。     

清洁级Long Evans大鼠生产性能的研究

目的通过对清洁级Long Evans大鼠生长发育及繁殖性能的主要指标测定,为其大量生产和使用提供基础数据。方法在屏障设施(SPF级)内饲养40对清洁级Long Evans大鼠种鼠,采用一雌一雄间隔同居方式交配5胎,测定其生长发育及繁殖性能的主要指标;从第2胎中选择60只离乳仔鼠,雌雄各半,间隔5d称重,描记生长曲线。结果以第2胎的产仔数、初生窝质量、离乳窝质量和离乳鼠质量最高,第5胎最低;描记的生长曲线与Taconic公司公布的相似。结论Long Evans大鼠以连续繁殖4胎为宜,第2胎最适合留种。     

浅谈现代医学实验动物工作中的科学管理

为了探索现代医学实验动物工作中科学管理新路子，我们根据本单位实际情况，从五个方面进行了有益尝试：(1)争取领导重视，改善使用条件，后勤保障跟上；(2)对从事实验动物工作的各类人员，实行资格认可制度；(3)坚持实验动物质量认可制度；(4)建立医学实验动物饲育室的管理制度和操作规程；(5)建立健全的执行操作规程的监督机构。     

猪线粒体DNA D-loop PCR的建立

建立猪线粒体ＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏｐ５‘端和３’端ＰＣＲ扩增方法。方法：设计三对引物,应用ＰＣＲ对西双版纳近交系小耳猪,广西巴马小型猪,贵州小型香猪,大约克夏猪,荣昌猪和长白猪血液总ＤＮＡ样品中ｍｔＮＤＡ Ｄ－ｌｏｏｐ,５‘端进行扩增,琼脂糖凝胶电泳检测,结果：三对引物扩增带清晰,与已知片段长度一致。结论：引物设计合理,扩增方法可行,为进一步应用ｍｔＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏｐ ＰＣＲ－ＰＲＬＰ,５’端ＳＳＰ     

川芎嗪抑制mTOR信号通路介导的帽依赖性翻译而诱导HRPC细胞凋亡

目的 明确川芎嗪(Ligustrazine,TMP)对激素抵抗性前列腺癌(hormone-refractory prostate cancer,HRPC)细胞PC-3的促凋亡效应并探讨其分子机制,评价TMP对正常前列腺上皮细胞RWPE-1的影响.方法 分别用不同终浓度的TMP处理PC-3细胞和RWPE-1细胞48、72 h后,行MTT实验及Annexin V/PI染色法评价TMP对这两种细胞活性及凋亡的影响;Western blot检测TMP对PC-3细胞中mTOR信号通路活化情况及凋亡相关蛋白表达的影响;pull-down及荧光素酶报告基因实验研究TMP对PC-3细胞中翻译起始复合物形成及帽依赖性翻译的影响.结果 TMP对RWPE-1细胞的活性及存活无显著影响,但以剂量依赖及时间依赖的方式抑制PC-3细胞的活性,当TMP浓度≥25μmol/L时,差异具有统计学意义(P＜0.05);与0 μmol/L处理组相比,50、100 μmol/L TMP处理24h即可显著上调PC-3细胞中Bax/Bcl-2比值及Caspase-3的表达,处理后48 h检测发现PC-3细胞发生明显的凋亡(P＜0.01);与0 μmol/L处理组相比,50、100 μmol/L TMP显著抑制PC-3细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及mTOR下游关键蛋白4EBP1和p70S6K的磷酸化,影响翻译起始复合物eIF4F的形成,进而抑制相关蛋白质的帽依赖性翻译及合成.结论 TMP可通过抑制mTOR信号通路的活化来降低HRPC细胞中增殖及抗凋亡相关蛋白的帽依赖性翻译,进而促进其凋亡.     

姜黄素对实验性肝纤维化大鼠结缔组织生长因子表达的影响

目的观察中药姜黄素抗四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。方法将50只Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、中药治疗1组及2组,于造模第1周及第4周开始用姜黄素治疗。免疫组织化学技术检测结缔组织生长因子(CTGF)在肝内表达及其在细胞中的定位含量。结果经中药姜黄素治疗后肝纤维化大鼠肝组织内CTGF表达降低,CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞质。结论中药姜黄素能有效地减轻CCl4诱导肝纤维化大鼠的损伤及纤维化程度,其机制可能是抑制肝内CTGF表达。