PVT1促进在胶质瘤C6细胞微环境中的BMSCs增殖和迁移

  目的  探讨与胶质瘤C6细胞间接共培养后骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖和迁移能力的变化以及长链非编码RNA（lncRNA）浆细胞瘤变异异位基因1（plasmacytoma variant translocation 1 gene,PVT1）在这种变化中的作用。  方法  分离、培养、鉴定BMSCs后,采用Transwell小室将生长状态良好的BMSCs与胶质瘤C6细胞间接共培养（共培养组）,单独培养的正常BMSCs为对照组。CCK8及软琼脂克隆形成实验检测2组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,划痕实验及Transwell法检测细胞的迁移能力,实时定量PCR（qRT-PCR）检测PVT1基因的表达。在共培养组BMSCs中转染si-PVT1（si-PVT1组）和si-NC（si-NC组）,转染后重复上述检测,并增加qRT-PCR检测周期蛋白基因CyclinD1及迁移相关基因基质金属蛋白酶2、9（ MMP2、 MMP9）的表达。  结果  所用BMSCs具有成骨、成脂分化能力。与对照组相比,共培养组BMSCs体积变小,排列紊乱,细胞间接触抑制消失,增殖及迁移能力增强,S期及G₂期细胞比例增加,PVT1表达增加（P<0.05）。与si-NC组比较,si-PVT1组抑制共培养BMSCs的增殖及迁移能力,G₁期细胞比例增加,S期细胞比例减少,PVT1、CyclinD1及 MMP2、MMP9 mRNA表达也降低（P<0.05）。  结论  胶质瘤C6细胞微环境中BMSCs增殖及迁移能力增强可能与PVT1高表达有关。     

晚期糖基化终产物通过调控F-actin/YAP抑制小鼠胚胎成骨细胞成骨分化

目的 考察晚期糖基化终产物（AGE）对小鼠胚胎成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其作用机制。方法 用不同质量浓度（100、200、300 mg/L）AGE作用于MC3T3-E1细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用碱性磷酸酶（ALP）染色检测细胞成骨能力,采用qPCR检测成骨相关基因（骨钙素、ALP和Runx2）及Yes相关蛋白（YAP）和β-联蛋白的mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测YAP和β-联蛋白的蛋白质表达,采用免疫荧光法观察YAP和β-联蛋白的细胞核内含量及细胞骨架蛋白纤丝状肌动蛋白（F-actin）的表达。结果 MC3T3-E1细胞在200、300 mg/L AGE处理后增殖活性降低、凋亡率增加（P均＜0.05）,100 mg/L AGE对细胞增殖和凋亡无明显影响,故选取100 mg/L AGE进行实验。在成骨诱导培养条件下,与对照组相比,MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后ALP染色较浅,骨钙素、ALP和Runx2的mRNA表达均较低（P均＜0.05）。在常规培养条件下,与对照组相比,MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后F-actin形态和分布发生明显改变;YAP的mRNA和蛋白质表达均无明显变化,但其细胞核内含量减少;β-联蛋白的mRNA和蛋白质表达均降低（P均＜0.05）,但其细胞核内含量无明显变化。结论 AGE能抑制MC3T3-E1细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,降低成骨分化能力,F-actin、YAP和β-联蛋白参与其调控过程。     

晚期糖基化终产物通过调控F-actin/YAP抑制MC3T3-E1细胞成骨分化

目的：研究晚期糖基化终产物(AGEs)对小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1增殖和分化的影响及其作用机制。方法：用不同浓度AGEs作用于MC3T3-E1细胞,采用CCK8法和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡,碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,ALP) 染色检测钙盐沉积,real-time PCR检测OCN、ALP和Runx2的mRNA表达,real-time PCR和蛋白印迹法分别检测YAP和β-catenin mRNA和蛋白表达,采用免疫荧光法观察二者的核内含量以及细胞骨架蛋白F-actin的变化。结果：MC3T3-E1细胞在不同浓度AGEs处理后增殖活性降低、凋亡率增加,且具有浓度依赖性。与对照组相比,MC3T3-E1细胞经AGEs处理后,ALP染色较浅,OCN、ALP和Runx2 mRNA表达量较低（P＜0.05）;细胞骨架蛋白F-actin形态和分布发生明显改变;YAP mRNA和蛋白含量均无明显变化,但其细胞核内含量减少;β-catenin 的mRNA 和蛋白量均降低（P＜0.05）,但其细胞核内含量无明显变化。结论：AGEs能抑制MC3T3-E1细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化能力,F-actin,YAP和β-catenin参与其调控过程。